نوع مقاله : پژوهشی- فارسی
نویسندگان
1 دانشیار میکروبیولوژی، دانشگاه رازی، کرمانشاه، ایران
2 کارشناس ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه رازی، کرمانشاه، ایران
چکیده
کلیدواژهها
موضوعات
عنوان مقاله [English]
نویسندگان [English]
 Introduction : Azo dyes account as the most dyes of all textile dyestuffs produced, and are the most common dye in textile industries. Azo dyes-containing effluents from these industries have caused serious environmental pollution . Compared with chemical/physical methods, biological processes have received more interest .  Materials and method s: In this study, we investigated effects of four factors including temperature, pH, dye concentration, salt concentration on decolorization of Remazol Black B by Halomonas sp. PTCC1714. The optimization of dye decolorization in 16 experiments with different conditions was statistically analyzed using Taguchi design in Qualitek-4 software .  Results : The results showed that Halomonas sp. PTCC1714 was able to decolorize Remazol Black B in varying salt at 5â20% (w/v), pH at 5-9, dye concentration at 100-5000 ppm and temperature 31-40 ËC. The optimum factor levels were a dye concentration of 100 ppm, salt concentation 10 % (w/v) and pH 9 and temperature 31ËC. The predicted value obtained for dye decolorization under these conditions was about 94% .  Discussion and conclusion : It can be concluded that Halomonas sp. PTCC1714 has a high potential for decolorization of Remazol Black B from textile wastewater under different conditions .
کلیدواژهها [English]
مقدمه
آلودگی محیط زیست یکی از مهمترین مسائل تهدید کننده جوامع بشری است. درچند دهه اخیر به دلیل افزایش فعالیتهای صنعتی و عدم رعایت الزامات زیست محیطی مقادیر زیادی از آلایندهها وارد محیط میشوند. رنگها از جمله مواد شیمیایی هستند که به میزان فراوانی در صنایع نساجی، چاپ، غذایی، دارویی و آرایشی استفاده میشوند (1- 3). امروزه رنگهای نساجی یکی از پرمصرف ترین مواد شیمیایی مصرفی هستند. در حدود ده هزار رنگ مختلف با تولید جهانی سالیانه بیش از هفتصد هزار تن به طور تجاری قابل دسترس هستند (3- 5). با وجود اینکه رنگهای آلی تنها بخش کوچکی از بار آلی پساب را تشکیل میدهد، وجود آنها از نظر ظاهری قابل قبول نیست. در میان رنگهای شیمیایی، رنگهای آزو[1] متداولترین رنگهای به کار رفته مصنوعی هستند و حدود 60 تا 70 درصد از رنگهای مصرفی را تشکیل میدهند (1، 3، 6 و 9). رنگهای آزو با پیوند N=N شناخته میشوند که دارای تنوع رنگی بالایی هستند و به عنوان یکی از آلایندههای مهم محیطزیست محسوب میشوند (6- 8). برخی رنگها و یا ترکیبات حاصل از تجزیه آنها سمی، جهشزا، سرطانزا و برای عمل فتوسنتز بسیار مضر هستند زیرا باعث جلوگیری از انتقال و نفوذ نور شده و بنابراین بر فعالیت فتوسنتز گیاهان آبزی تاثیر گذاشته باعث افزایش COD فاضلابها میشوند. در نتیجه حتی در غلظتهای کم، زندگی جانوران آبزی را به مخاطره انداخته واز طریق جانوران آبزی وارد چرخه غذایی انسانها میشود. یکی از انواع رنگهای آزو ماده رنگزای ریمازول بلک-B (RB-B) است که در صنایع نساجی و چرم استفاده زیادی دارد و به عنوان یکی از آلایندههای مهم محیط زیست محسوب میشود، بنابراین، حذف این ماده رنگزا از پساب ضروری است (7 و 10- 14).
امروزه سیستمهای تصفیه متداولی برای حذف رنگها در دسترس است که وابسته به اصول فیزیکی و شیمیایی مانند: جذب، انعقاد، فیلتراسیون، ته نشینی و سایر... است. از محدودیتها و مشکلات این روشها میتوان به هزینه بالا، تولید مقدار زیاد لجن و در نهایت ایجاد آلودگیهای ثانویه اشاره کرد (1، 3 و 15- 18). امروزه حذف رنگ به روش زیستی مورد توجه زیادی قرار گرفته است (16-19 و 21). روشهای تصفیه زیستی راهکاری آسان، دایمی، ارزان و موثر برای پالایش فاضلابهای آلوده به مواد رنگزاست. در این روشها از میکروارگانیسمهایی مانند: باکتریها، قارچها، جلبکها، اکتینومیستها، که توانایی حذف رنگهای آزو رادارند استفاده میشود (23 و 24). سیکل رشد طولانی و میزان رنگ زدایی متوسط قارچها و جلبکها باعث شده کاربرد سیستمهای رنگزدایی توسط آنها محدود شود، در مقابل رنگ زدایی توسط باکتریها، سریعتر انجام میشود (16 و 22).
پساب بسیاری از کارخانجات نساجی ایران به دلیل موقعیت جغرافیایی در زمینهای شور و کویری رها میشود، همچنین، در مراحلی از رنگرزی برای بالا بردن کارایی از نمکهای محلول مانند سدیم کلرید و پتاسیم کلرید استفاده میشود. بنابراین، میکروارگانیسمهایی قادر به حذف رنگ از پساب میباشند که بتوانند این شرایط سخت را تحمل و در آن رشد و فعالیت کنند (3، 25 و 26). با توجه به دلایل ذکر شده، استفاده باکتریهای نمکدوست[2] و تحملپذیر نمک[3] انتخاب خوبی برای تصفیه اینگونه پسابها به شمار میآید، زیرا این باکتریها تحملپذیری بالایی به شرایط سخت محیطی مانند وجود مقدار بالای نمک و مواد آلاینده مانند فلزات سنگین و اکسی آنیونها از خود نشان میدهند (27 و 28). در این تحقیق، توانایی رنگبری باکتری هالوموناس سویه PTCC 1714 جدا شده از دریاچه ارومیه در حذف ماده رنگزای ریمازول بلک-B از محیط آبی و تعیین شرایط بهینه این باکتری در حذف رنگ بررسی شد. لزوم استفاده از این سویه از باکتری در این تحقیق، بیشتر بومی بودن آن بوده و همچنین، نمک دوستی است و طبق دلایل ذکر شده گزینه مناسبی برای حذف رنگهای آزو از محیطهای شور محسوب میشود.
مواد وروشها
باکتری PTCC1714 Halomonas sp. (جداشده از دریاچه ارومیه) از سازمان پژوهشهای علمی صنعتی ایران تهیه شد. برای رشد باکتری از محیط کشت نمکی شامل:10گرم گلوکز، 4/1 گرم MgSO4. H2O، 3/2گرم NH4Cl، 6/0گرم K2HPO4، 01/0گرم FeSO4. 7H2O و100گرم NaCl در حجم کل یک لیتر استفاده شد.
در این تحقیق، از رنگ ریمازل بلک-B (RB-B)، به عنوان نماینده رنگهای آزو استفاده شد، که از پرمصرف ترین رنگها در صنعت نساجی به شمار میآید. این رنگ دی آزوی[4] سولفاناته، با فرمول شیمیایی C12H21N5Na4O19S6 و وزن مولکولی82/991 گرم بر مول از شرکت سیبا[5] تهیه شد. ساختار رنگ در شکل 1 نشان داده شده است.
شکل 1- ساختاررنگ ریمازل بلک-B (11)
روش طراحی آزمایش
در این پژوهش، برای طراحی آزمایش و تعیین شرایط بهینه رنگبری سویه مورد مطالعه از روش تاگوچی[6] استفاده شد. روش تاگوچی یک روش طراحی آزمایش از نوع کسری از فاکتوریل کامل است، که در این روش تعدادی از ترکیبهای ممکن بین متغیرها انتخاب میشود. انتخاب این تعداد بر اساس طرح آزمایش به کار رفته، طوری انجام میشود که واریانس خطا، با حالتی که تمام ترکیبهای ممکن اجرا شود، یکسان باشد. پس از انجام آزمایشها و با ارزیابی پاسخهای بهدست آمده، بهترین پاسخ انتخاب میشود. در این روش با کاهش تعداد آزمایشها، زمان کل انجام آزمایشها نیز تا حد زیادی کاهش مییابد (41).
در روش تاگوچی اولین گام، تعیین عوامل موثر و سطوح آنهاست. در میان عوامل موثر در رشد و رنگبری این سویه، دما، اسیدیته و غلظت نمک اهمیت زیادی دارند. همچنین، با توجه به بررسی میزان حذف رنگ، یکی از عاملها نیز غلظت رنگ محیط در نظر گرفته شد. به طور کلی چهار عامل درجه حرارت، غلظت نمک، غلظت رنگ و اسیدیته با چهار سطح در نظر گرفته شد. در جدول 1 عاملها و سطوح بررسی شده نشان داده شده است.
جدول 1- عوامل و سطوح مورد بررسی در طراحی آزمایشها
عامل |
سطح 1 |
سطح 2 |
سطح 3 |
سطح 4 |
دما (درجه سانتیگراد) |
31 |
33 |
35 |
40 |
اسیدیته |
5 |
5/6 |
5/7 |
9 |
غلظت رنگ (ppm) |
100 |
500 |
1000 |
5000 |
غلظت نمک (درصد ) |
5 |
10 |
15 |
20 |
بررسی رنگبری در شرایط محیطی متفاوت
با توجه به جدول آرایههای متعامد شامل: چهار عامل و چهار سطح، شانزده آزمایش طراحی شد. در جدول 2 آزمایشها نشان داده شده است. شایان ذکر است اختلاف مشاهده شده بین سطوح از نظم خاصی تبعیت نمیکند و به شکل انتخابی است.
برای انجام هر آزمایش 20 سی سی از محیط کشت یاد شده را در ارلنهای 100 ریخته، پس از تنظیم اسیدیته و غلظترنگ با توجه به شرایط تعیین شده توسط نرمافزار، به هر ارلن 5 درصد آلودگی تلقیح کرده و ارلنها را برای هوادهی درون انکوباتور شیکردار با دور rpm 120 در دمای مشخص شده به مدت 5 روز گذاشته و مقدار حذف رنگ با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتر بررسی شد.
جدول 2- عوامل و سطوح انتخابی توسط تاگوچی
غلظت نمک |
رنگ غلظت |
اسیدیته |
دما |
آزمایشها |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
2 |
2 |
2 |
1 |
2 |
3 |
3 |
3 |
1 |
3 |
4 |
4 |
4 |
1 |
4 |
3 |
2 |
1 |
2 |
5 |
4 |
1 |
2 |
2 |
6 |
1 |
4 |
3 |
2 |
7 |
2 |
3 |
4 |
2 |
8 |
4 |
3 |
1 |
3 |
9 |
3 |
4 |
2 |
3 |
10 |
2 |
1 |
3 |
3 |
11 |
1 |
2 |
4 |
3 |
12 |
2 |
4 |
1 |
4 |
13 |
1 |
3 |
2 |
4 |
14 |
4 |
2 |
3 |
4 |
15 |
3 |
1 |
4 |
4 |
16 |
بررسی میزان رنگ و کدورت در محیط
ابتدا طیف جذبی رنگ RB-B در محدوده 200 تا 800 نانومتر با استفاده از اسپکتروفوتومتر تعیین شد، تا بیشینه طول موج جذبی رنگ RB-B مشخص شود. ماکزیمم طول موج جذبی آن در 595 نانومتر بود. از ارلنهای گرماگذاری شده برای اندازهگیری طیف جذبی در طول موج 595 نانومتر، 2 میلیلیتر نمونه برداشته و با دور rpm 12000 به مدت 3 دقیقه سانتریفوژ شد. مایعرویی را برداشته و در 595 نانومتر میزان جذب نور اندازهگیری شد. از آنجا که ماکزیمم حذف رنگ در روز سوم بود و پس از 3 روز به علت مرگ باکتری جذب کاهش مییافت، درصد رنگبری مطابق فرمول زیر محاسبه شد.
A = جذب در محیط پس از رنگبری
=Aoجذب در محیط شاهد (اولیه)
= Dدرصد رنگبری
نتایج
پس از احراز شرایط لازم برای هر 16 آزمایش مشخص شده به وسیله نرم افزار تاگوچی و انجام آزمایشها و بررسی میزان رنگبری در محیط، نتایج به کمک برنامه کامپیوتری Qualitek-4 تجزیه و تحلیل و اثرات مربوط به هر سطح محاسبه شد. نتایج حاصل از این تحلیل آماری در جدول 4 آمده است.
در جدول 4 تاثیر هر سطح از هر عامل بر روی رنگبری این سویه نشان داده شده است، که عامل دما در سطح 1 یعنی 31 درجهسانتیگراد، اسیدیته در سطح 4 یعنی اسیدیته برابر 9، غلظترنگ محیط در سطح 1 یعنی ppm 100 و درصدنمک محیط در سطح 2 یعنی غلظت 10 درصد نمک کلرید سدیم بیشترین تاثیر را در رنگبری رنگ RB-B توسط باکتری هالوموناس سویه PTCC 1714 دارند.
جدول 3- نتایج نهایی درصد رنگبری رنگ ریمازل بلک–B توسط باکتری هالوموناس سویه PTCC 1714
آزمایشها |
درصد رنگبری |
آزمایشها |
درصد رنگبری |
آزمایشها |
درصد رنگبری |
آزمایشها |
درصد رنگبری |
1 |
86/51 |
5 |
59/22 |
9 |
50/21 |
13 |
صفر |
2 |
87/53 |
6 |
22/20 |
10 |
48/0 |
14 |
صفر |
3 |
38/35 |
7 |
04/27 |
11 |
91/59 |
15 |
61/9 |
4 |
90/63 |
8 |
21/59 |
12 |
45 |
16 |
27/40 |
جدول 4- اثر سطوح مختلف عاملها بر میزان رنگبری باکتری هالوموناس سویه PTCC 1714
عامل |
سطح 1 |
سطح 2 |
سطح 3 |
سطح 4 |
دما |
252/51 |
264/32 |
722/31 |
47/12 |
اسیدیته |
987/23 |
642/18 |
985/32 |
095/52 |
غلظت رنگ |
065/43 |
767/32 |
022/29 |
855/22 |
غلظت نمک |
975/30 |
247/43 |
68/24 |
807/28 |
جدول 5- تخمین تاثیرات متقابل بین شاخصهای مختلف بر میزان رنگبری باکتری هالوموناس سویه PTCC 1714
تاثیر جفت عامل بر اساس (SI) |
ستونها |
شدت تاثیر متقابل ( درصد ) |
ستون |
شرایط بهینه |
عاملاسیدیته × عاملنمک |
4×2 |
73/82 |
6 |
(4، 4) |
عاملاسیدیته × عامل رنگ |
3×2 |
23/49 |
1 |
(4، 4) |
عامل دما× عاملنمک |
4×1 |
59/23 |
5 |
(1، 4) |
عامل دما× عاملاسیدیته |
2×1 |
42/3 |
3 |
(1، 4) |
عامل رنگ× عامل نمک |
4×3 |
64/0 |
7 |
(4، 4) |
عامل دما× عاملرنگ |
3×1 |
28/0 |
2 |
(1، 4) |
در جدول 5 تاثیرات متقابل عاملها مشخص شده است. این تاثیرات متقابل بر اساس شاخص میزان بین دو عامل انتخابی اندازهگیری میشود، که از 73/82 تا 28/0 درصد تغییر میکند. شدت تاثیر متقابل بین دو عامل که کمترین تاثیر را در رنگبری رنگ RB-B دارند شامل: عامل دما در برابر عامل رنگ و حدود 28/0 درصد است. بیشترین درصد شاخص شدت تاثیر متقابل 73/82 درصد است که به تاثیر متقابل عامل اسیدیته در برابرعامل غلظتنمک مربوط است. مقایسه شاخص شدت تاثیر متقابل بین عاملها در این جدول نشان میدهد که اثر یک عامل در بهینهسازی رنگبری بسته به شرایط عاملهای دیگر دارد.
تعیین شاخصهای تاثیرگذار در رنگبری رنگ RB-B به کمک تحلیل واریانس در جدول 6 نشان داده شده است. ستون آخر اثرات هر یک از عاملها را در رنگبری تعیین میکند. عامل دما موثرترین عامل برای رنگبری رنگ RB-B توسط باکتری هالوموناس سویه PTCC 1714 است، پس از آن عامل اسیدیته و سپس غلظت رنگ و درپایان غلظت نمک به ترتیب بیشترین تاثیر را دارد.
جدول6- تحلیل واریانس برای رنگبری رنگ RB-B توسط باکتری هالوموناس سویه PTCC 1714
ستون عامل |
درجه آزادی |
مجموع مربعات |
واریانس |
مجموع مربعات خالص |
درصد |
دما |
3 |
823/3008 |
941/1002 |
007/2671 |
314/35 |
اسیدیته |
3 |
524/2589 |
174/863 |
709/2251 |
771/29 |
غلظت رنگ |
3 |
995/861 |
331/287 |
18/524 |
93/6 |
غلظت نمک |
3 |
242/765 |
08/255 |
427/427 |
651/5 |
جدول7- شرایط بهینه برای رنگبری توسط باکتری هالوموناس سویه PTCC1714
عامل |
سطح |
سهم (درصد) |
دما |
1 |
325/19 |
اسیدیته |
4 |
167/20 |
غلظت رنگ |
1 |
137/11 |
غلظت نمک |
2 |
32/11 |
جمع سهم عاملها |
- |
948/61 |
میانگین |
- |
927/31 |
نتیجه قابل انتظار درشرایط بهینه |
- |
876/93 |
در جدول7 سهم هرکدام از عاملها در طی دورهها مشخص شده است. طبق این جدول دما و اسیدیته نقش مهمی در رنگبری این سویه دارند. تحت شرایط بهینه نشان داده شده در این جدول که در جدول2 نیز بیان شده انتظار میرود نزدیک 94 درصد حذف رنگ از محیط آبی داشته باشد.
بحث و نتیجهگیری
تاثیر دما بر رنگ زدایی
نتایج نشان داد که بیشتر فعالیت رنگزدایی در 31 درجه سانتیگراد انجام میشود، و با افزایش دما تا 40 درجه سانتیگراد باعث کاهش فعالیت رشد این سویه باکتری شده، در نتیجه رنگبری نیز کاهش مییابد (شکل 2).
شکل 2- نمودار تاثیر دما در رنگزدایی رنگ RB-B توسط باکتری هالوموناس سویه PTCC 1714
تاثیر اسیدیته در رنگ زدایی
نتایج نشان داد که وقتی اسیدیته اولیه پایین است، فعالیت رنگزدایی بسیار کند میشو. میزان رنگزدایی با افزایش اسیدیته محیط به ،9 به حداکثر میرسد (شکل 3). اهمیت اسیدیته در رنگبری از این نظر است که در مراحلی از فرآیند رنگرزی الیاف، در مورد گروهی از رنگهای آزو، برای بالا بردن کارایی عملیات رنگبری، اسیدیته محیط باید قلیایی باشد (3 و 29). از آنجا که باکتری هالوموناس سویه PTCC1714 در شرایط با اسیدیته بالا قابلیت رشد و رنگزدایی را دارد گزینه مناسب برای رنگزدایی این رنگ آزوی سمی است.
شکل 3- نمودار تاثیر اسیدیته در رنگزدایی رنگ RB-B توسط باکتری هالوموناس سویه PTCC 1714
تاثیرغلظت رنگ بر رنگ زدایی
فعالیت رنگزدایی این سویه در حضور غلظتهای مختلف رنگ RB-B از 100 تا ppm500 بررسی شد. نتایج نشان داد که میزان رنگزدایی با افزایش غلظت رنگ اولیه کاهش مییابد و بیشترین میزان رنگزدایی در غلظت ppm 100 است. رنگهای آزو عموما دارای یک یا چند گروه سولفونیک اسید در حلقه آروماتیک خود هستند که باعث سمیت آنها میشود و از طرف دیگر مانع رشد اکثر میکروارگانیسمها میشوند و این رنگها در سنتز DNA تاثیر گذاشته و باعث اختلال در سنتز DNA میشوند (3). به این دلیل با افزایش غلظت رنگ سمیت آن بالا رفته و باعث مرگ باکتری میشود و رنگبری کاهش مییابد (شکل 4).
شکل 4- نمودار تاثیر غلظت رنگ در رنگزدایی رنگ RB-B توسط باکتری هالوموناس سویه PTCC 1714
تاثیر غلظت نمک بر رنگ زدایی
با توجه به نتایج حاصل از تحلیل آماری به وسیله نر افزار Qualitik-4 باکتری هالوموناس سویه PTCC1714 در غلظت نمک 10 درصد بیشترین میزان رنگزدایی را داشته و با افزایش مقدار نمک میزان رنگبری آن کاهش مییابد. (شکل 5).
شکل 5- نمودار تاثیر غلظت نمک در رنگزدایی رنگ RB-B توسط باکتری هالوموناس سویه PTCC 1714
کلبسیا پنومونیه RS-13[vii] رنگ متیل رد[viii] را به طور کامل در اسیدیته بین 6 تا 8 تجزیه میکند. در حالی که آلکالی ژنز لیکویفاشنس S-1[ix] میتواند متیل رد را در اسیدیته 5/6 به طور کامل تجزیه نماید (37).
میل و همکارانش[x] در سال 1999 دریافتند که اسیدیته بین 6 تا 8، اسیدیته بهینه برای رنگ زدایی رنگهای آزو وتری فنیل متان[xi]، توسط سویههای سودوموناس است (38).
کنسرسیوم باکتریایی [xii]pvm11. 1 بهترین رنگزدایی رنگ 5 Reactive violet را در اسیدیته بین 7 تا 5/8 نشان داد (18). توانایی رنگبری در غلظتهای بالای رنگ مثلا تا ppm 5000 رنگ از صفاتی است که کمتر سویههایی با این توانایی گزارش شده است (31- 34). طبق تحقیقاتی که اسد و همکارانش[xiii] در سال 1386 بر روی باکتریهای نمکدوست جدا شده از پساب نساجی انجام دادند از بین نمکهای مختلف، سدیم کلرید بیشترین اثر را بر رنگبری نشان داد. آنها اعلام کردند که حضور این نمک برای رشد و فعالیت باکتریهای نمک دوست و تحمل پذیر نمک ضروری است (35). البته توانایی رنگبری در محدوده وسیعی از غلظت نمک نکته مثبتی است که استفاده از سویه مورد نظر را برای رنگبری پساب در صنعت مناسب میسازد. باکتریهای نادری قادر به رنگبری در شرایط هوادهی هستند (36). اینکه سویه مورد نظر ما نیز در شرایط هوازی قادر به رنگبری است حائز اهمیت است. همچنین، در این مطالعه مشخص شد که باکتری ذکر شده میتواند در شرایط مختلف رنگ RB-B را از محیط حذف نماید. با توجه به ویژگیهای سویه مورد مطالعه در این تحقیق (شامل: تجزیه هوازی رنگ RB-B، رشد در شرایط سخت از جمله غلظت نمک بالا، غلظت رنگ بالا، و اسیدیته بالا، و هزینه پایین کشت) میتوان گفت سویه مذکور انتخاب مناسبی برای استفاده در عملیات تصفیه پساب کارخانجات نساجی است. البته تاکنون گزارشی در مورد استفاده از نمکدوستها بهشکل فعال در رنگبری پساب گزارش نشده است (31- 32 و 39- 40). بنابراین، باید تحقیقات بیشتری به منظور استفاده در پساب نساجی بر روی این سویه انجام شود.