دانشگاه اصفهانزیست شناسی میکروبی3060-764751720160521Determination and modeling the optimum conditions of beta glucanase Bacillus subtilis B5d activity with potential used as feed additiveتعیین و مدل سازی شرایط بهینه کاتالیتیکی آنزیم بتاگلوکاناز باسیلوس سابتیلیس B5d1142036410.22108/bjm.2016.20364FAشعلهده پهلوانکارشناس ارشد فیزیولوژی گیاهی، دانشگاه ارومیه، ایرانجلیلخارادانشیار فیزیولوژی گیاهی، دانشگاه ارومیه، ایرانمریمموسیوندکارشناسی ارشد بیماری شناسی، پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، کرج، ایرانمریمهاشمیاستادیار بیوتکنولوژی غذایی، پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، کرج، ایرانJournal Article20161004Introduction: Microbial β - 1, 4 glucanase is one of the key enzymes in glucan hydrolysis. Among bacteria, Bacillus species is a main source for industrial glucanse production. According to interaction between environmental factors on the enzymatic catalytic properties, in this study the potential of β-glucanase production by native strain B. subtilis B5d isolated from apple phyllosphere orchards and determination and modeling the optimum conditions of enzyme activity was surveyed. <br /> <br />Materials and methods: In this study, the potential of β-glucanase production by B. subtilis B5d was confirmed using qualitative method. The B. subtilis B5d isolate was identified through biochemical and molecular methods. Determination of optimum condition for beta glucanase activity was evaluated by response surface method and Central Composite Design. Investigated variables included temperature (20- 80 °C), pH (3.5- 8) and concentration of substrate (0.1- 1%). <br /> <br />Results: According to the molecular and biochemical analysis, the strain B. subtilis B5d belonges to B.subtilis species. Based on the Central Composite Design results, the quadratic model was the most suitable model for predicting β-glucanase activity in experimental temperature, pH and substrate concentration range. Furthermore, the optimization of enzyme activity showed that the β-glucanase produced by strain B5d has highest catalytic activity at pH (5.5- 7) and temperature (50- 65°C) and the high concentration of lechinan. However, the enzyme activity is reduced in 80 and 20 °C as well as low concentration of substrate. Validation test of the prediction model of optimization obtained by response surface methodology showed a good agreement between experimental and predicted data. <br /> <br />Discussion and conclusion: According to the optimum catalytic characteristics, the β-glucanase produced by B. subtilis B5d has a potential to be used as a feed additive.مقدمه: اندو-بتا-1و4 گلوکاناز میکروبی از جمله آنزیمهای کلیدی در تجزیه گلوکان است. در میان باکتریها، گونههای مربوط به جنس باسیلوس یکی از منابع اصلی تولید کننده گلوکانازهای صنعتی هستند. هدف پژوهش حاضر، با توجه به تأثیر متقابل شاخصهای محیطی بر خواص کاتالیتیکی آنزیمها، بررسی توانایی تولید آنزیم بتاگلوکوناز توسط سویه بومی باسیلوس سابتیلیس B5d جدا شده از فیلوسفر باغات سیب و تعیین شرایط بهینه کاتالیتیکی آن است. <br /> <br /> مواد و روش ها: در بررسی حاضر، پتانسیل تولید آنزیم بتاگلوکاناز از جدایه باسیلوس B5d به روش کیفی تایید شد. جدایه یاد شده با روشهای بیوشیمیایی و مولکولی شناسایی شد. تعیین شرایط بهینه فعالیت آنزیم بتاگلوکوناز تولیدی توسط باسیلوس سابتیلیس B5d به روش سطح پاسخ و با استفاده از طرح مرکب مرکزی انجام شد. متغیرهای مورد بررسی شامل دما (20 تا80 درجه سانتیگراد) ٬ اسیدیته (5/3 تا 8) و غلظت سوبسترا (1/0 تا 1 درصد) بودند. <br /> <br /> نتایج: مطالعات بیوشیمیایی و مولکولی مبتنی بر ژن 16 S rDNA نشان داد که جدایه یاد شده به گونه باسیلوس سابتیلیس متعلق است. بر اساس نتایج به دست آمده از طرح مرکب مرکزی، مدل درجه دوم مناسبترین مدل برای پیشبینی فعالیت آنزیم بتاگلوکاناز در دامنه دمایی، اسیدیته و غلظت سوبسترای مورد بررسی تعیین شد. همچنین، نتایج بهینهسازی فعالیت آنزیم نشان داد که بتاگلوکوناز تولید شده توسط سویه B5d اپتیمم فعالیت کاتالیتیکی را در دامنه اسیدیته 5/5 تا 7و دمای 50 تا 65 درجه سانتیگراد و غلظت بالای سوبسترا داراست. اگرچه در دماهای 80 و 20 درجه سانتیگراد و همچنین، غلظتهای کم سوبسترا فعالیت آنزیم کاهش مییابد. نتایج تعیین صحت مدل حاصل از بهینهسازی به روش سطح پاسخ مطابقت خوبی را بین اعداد پیشبینی شده توسط مدل و دادههای واقعی نشان داد. <br /> <br /> بحث و نتیجه گیری: با توجه به ویژگیهای بهینه کاتالیتیکی، آنزیم بتاگلوکاناز تولید شده توسط باسیلوس سابتیلیس B5d قابلیت کاربرد در صنایع خوراک دام و طیور را داراست. https://bjm.ui.ac.ir/article_20364_f9a45b74035a0ed6599cd4c8cc21255e.pdfدانشگاه اصفهانزیست شناسی میکروبی3060-764751720160521Survey of Antibacterial Effect of Methanolic Extract of Fulgensia fulgens through in Vitro and in Vivo Conditionsبررسی فعالیت ضدمیکروبی عصاره متانولی گلسنگ فولجنسیا فولجنس در شرایط in vitro و in vivo15262036510.22108/bjm.2016.20365FAطاهرهولدبیگیاستادیار زیست شناسی، دانشگاه ایلام، ایرانسمیهراشکیکارشناس ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه ایلام، ایرانJournal Article20161004Introduction: Daily increasing of bacteria resistance (specially Staphylococcus aureus) to various antibiotics in particular penicillin and methicillin has always led the scientists to look for new medicines. <br /> <br />Materials and methods: 600 g of Fulgensia fulgens was collected from KaneGonbad mountains in Ilam province, the methanol extract was prepared by soxhle. In vitro antimicrobial activity of the extract against two gram-positive bacteria (S. aureus and Entrococcus faecalis) and two gram-negative bacteria (Pseudomonas aeruginosa and Escherchia coli) was tested by the use of disc diffusion method and microdilution (with determination of MIC and MBC). Wound was made on the dorsal surface of therat and wound infections caused by S.aureus for determination of in vivo antibacterial effect. Than rats were randomly divided into three groups; control, treated with tetracycline ointment and treated with 10% ointment of F. fulgens extract. Finally, wound areas wear measured on days 3, 5, 7, 9 and 11. <br /> <br />Results: Average inhibitory zone diameter of methanolic F. fulgens extract against S. aureus ranged between 11.21 mm to 33.01 mm. According to the wound area on 11th day, it could be concluded that there was a statistically significant difference between the control group (0.63 cm2) and two treatment groups (0) (p<0.05). There was no significant difference between a group treated with tetracycline ointment and a group treated with 10% ointment of extract. <br /> <br />Discussion and conclusion: According to the results, the methanol extract of F. fulgens in the treatment of infections as S. aureus can be replaced by chemical antibiotics.مقدمه: مقاومت روز افزون باکتریها (به ویژه استافیلوکوکوس اورئوس) به انواع آنتیبیوتیکها به ویژه پنیسیلین و متیسیلین سبب شده است که دانشمندان همیشه به دنبال یافتن داروهای جدید باشند.<br /> <br /> مواد و روش ها: 600گرم فولجنسیا فولجنس از کوههای کانگنبد در استان ایلام جمعآوری و عصاره متانولی آن با استفاده از سوکسله تهیه شد. خواص ضدباکتری عصاره در شرایط in vitro به روش انتشار دیسک و میکرودایلوشن (با تعیین MIC و MBC) روی دو باکتری گرم مثبت (استافیلوکوکوس اورئوس و انتروکوکوس فکالیس) و دو باکتری گرم منفی (سودوموناس آئروجینوزا و اشریشیا کلی) بررسی شد. برای تعیین اثرات ضدباکتری در شرایط<br /> in vivo، زخمی روی سطح پشتی موش ایجاد و به باکتری استافیلوکوکوس اورئوس آلوده شد. سپس، موشها به طور تصادفی به سه گروه تقسیم شدند: کنترل، تحت درمان با پماد تترا سایکلین و تحت درمان با پماد10 درصد عصاره متانولی فولجنسیا فولجنس. در نهایت، مساحت زخم در روزهای سوم، پنجم، هفتم، نهم و یازدهم اندازهگیری شد.<br /> <br /> نتایج: میانگین قطر هاله عدم رشد عصاره متانولی فولجنسیا فولجنس بر علیه استافیلوکوکوس اورئوس بین 21/11 میلیمتر تا 01 /33 میلیمتر بود. با توجه به اندازه سطح زخم در روز یازدهم میتوان نتیجه گرفت که تفاوت معناداری بین گروه کنترل (63/0 سانتیمتر مربع) و دوگروه درمان (0) وجود داشت (05/0 P value<). در حالیکه بین گروه تحت درمان با پماد تتراسایکلین و گروه تحت درمان با پماد 10 درصد عصاره تفاوت معناداری وجود نداشت. <br /> <br /> بحث و نتیجه گیری: با توجه به نتایج، عصاره متانولی فولجنسیا فولجنس میتواند جایگزین آنتیبیوتیکهای شیمیایی در درمان عفونتهایی مانند استافیلوکوکوس اورئوس باشد.https://bjm.ui.ac.ir/article_20365_2924d9b28ee9200486ece120ff3c1a87.pdfدانشگاه اصفهانزیست شناسی میکروبی3060-764751720160521Frequency distributions of Escherichia coli in the confectionery products offered in retail market in Isfahanفراوانی جمعیت اشریشیا کلی در شیرینیهای عرضه شده در شهر اصفهان27342036610.22108/bjm.2016.20366FAرسولرضاییدانشجوی کارشناسی ارشد بهداشت و ایمنی مواد غذایی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، ایرانملیحهصادقیدانشجوی کارشناسی ارشد بهداشت و ایمنی مواد غذایی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، ایرانحاجیهقاسمیان صفاییدانشیار میکروبیولوژی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، ایرانمریممیرلوحیاستادیار علوم و صنایع غذایی، مرکز تحقیقات امنیت غذایی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، ایراناکبرحسن زادهمربی آمار و اپیدمیولوژی، مرکز تحقیقات امنیت غذایی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، ایرانJournal Article20161004Introduction: Raw ingredients used in confectionary carry high risk of infection with Escherichia coli. Since confectionaries are offered in the market in quite varied forms and types and there is a great difference in the sanitary status of the confectionaries, this study aimed at evaluation of E.coli frequency distribution in different types of confectionery products in Isfahan market. In addition, the effect of moisture content, products category and the sanitary level of the confectionaries as well as product types (Industrially or traditionally produced) on the contamination level were studied. <br /> <br />Materials and methods: A total of 200 samples were randomly collected from confectioneries in Isfahan city through simple random sampling method. Preparation and dilution procedures were conducted under sterile conditions. Samples were cultured on EMB agar medium. Later, some of the positive isolates were randomly selected and confirmed by TSI and IMVIC test. Data analysis was performed using descriptive indices. Also, one way ANOVA and LSD test or independent t test were applied to determine the statistically significant difference between the mean E.coli cell numbers in the categorized groups of sweets. <br /> <br />Results: It was found that 19% of the total tested samples were contaminated with E.coli strains. The mean, median and maximum of contamination were (35±.5), (0) and (3.4) CFU/gr, respectively. Moisture content, products category and being traditionally or industrially produced have significant effects on the level of contamination; while, the sanitary status of the traditional confectionaries as graded in this study has no impact on the average E.coli cell count. <br /> <br />Discussion and conclusion: Regarding the microbial quality, at least about 25% of the sweets in the market do not meet the national standards of confectionary products. Implementation of strict hygiene regulation in the traditional confectionaries is in need to provide the public with safe, guaranteed products.مقدمه: قابلیت بالای آلوده شدن مواد اولیه شیرینی به میکروارگانیسم اشریشیا کلی، تنوع شیرینیها و تفاوت قابل توجه در سطح بهداشتی محل تولید و عرضه موجب شد تا پژوهش حاضر ضمن مطالعه شاخصهای پراکندگی این میکروارگانیسم در شیرینیهای شهر اصفهان اثر چهار عامل رطوبت، نوع شیرینی، سطح بهداشتی محل تولید و عرضه و نوع فرآورده از نظر صنفی و صنعتی بودن بر میزان آلودگی را بررسی کند. <br /> <br /> مواد و روش ها: تعداد 200 نمونه از سطح شهر نمونهگیری و آزمون میکروبی با کشت سطحی بر محیط ائوزین متیل بلو آگار انجام شد. سپس، تعدادی از نمونههای مثبت بهطور تصادفی انتخاب و با آزمونهای تاییدی IMVIC و TSI بررسی شد. در تحلیل دادهها از آزمونهای توصیفی، تجزیه واریانس و آزمون تعقیبی توکی یا آزمون T مستقل با سطح معناداری 95 درصد در نرم افزار SPSS استفاده شد. <br /> <br /> نتایج: نتایج گویای آلودگی 19 درصد از کل نمونهها با میانگین، میانه و بیشنیه شمارش به ترتیب (05/0 ±35 /0)، صفر و 40 /3 لگاریتم پرگنه در هر گرم بود. عوامل رطوبت، نوع شیرینی و نوع فرآورده از نظر صنفی و صنعتی بودن اثر معناداری (P value<0.05) در میانگین آلودگی داشت اما تفاوت در سطح بهداشتی محل تولید و عرضه در میان شیرینیهایی که به شکل صنفی عرضه شده بودند اختلاف معناداری در میانگین الودگی ایجاد نکرد.<br /> <br /> بحث و نتیجه گیری: حدود یک پنجم از کل شیرینیهای عرضه شده فاقد ضابطه استاندارد از نظر الودگی به اشریشیا کلی هستند. برقراری استانداردهای بهداشتی قوی در واحدهای صنفی نیاز اصلی در تضمین ایمنی شیرینی ها است. https://bjm.ui.ac.ir/article_20366_6dcd381c6c70773ce88243f36f09e637.pdfدانشگاه اصفهانزیست شناسی میکروبی3060-764751720160521Effect of exogenous ectoines on some antifungal activity of Pseudomonas fluorescens UTPF5 under salt conditionsتأثیر اکتوئین و هیدروکسی اکتوئین خارجی بر برخی فعالیتهای ضد قارچی سویه Pseudomonas fluorescens UTPF5 در شرایط شوری35482036710.22108/bjm.2016.20367FAارغوانکمالیدانشجوی دکتری کنترل زیستی، پردیس کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه تهران، کرج، ایرانمسعوداحمدزادهاستاد کنترل زیستی، پردیس کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه تهران، کرج، ایراناکرمصادقیاستادیار ژنتیک مولکولی، پژوهشکده پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران،کرج، ایرانابراهیمکریمیکارشناس ارشد بیماریشناسی گیاهی، پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، کرج، ایرانJournal Article20161004Introduction: Plant probiotic bacteria like fluorescent pseudomonads are worldly used against soil-borne pathogens through mechanisms such as production of bacterial metabolites and enzymes. These bacteria can also help plants to tolerate environmental stresses. Ectoine is a compatible solution which plays an important role in environmental osmotic stresses. <br /> <br />Materials and methods: Tolerance of 24 bacterial strains to salt and heat was tested and 6 tolerant strains were chosen. Then dual culture of Fusarium solani and bacteria grown in presence of ectoine and hydroxy ectoine with 3 NaCl concentrations (0, 150 and 300 mM) was done and Pseudomonas fluorescens UTPF5 was selected. Finally the effect of ectoine, hydroxyectoine and NaCl on bacterial population, lipase, protease, siderophore and hydrogen-cyanide production and biofilm formation was investigated. <br /> <br />Results: In 300 mM NaCl, the bacterium grown in presence of ectoines, increased the inhibition percentage 5- times more than control. NaCl had a positive effect on bacterial population in water and ectoine, hydrogen-cyanide production in all treatment and biofilm formation in ectoine and hydroxyectoine and negative effect on bacterial population in hydroxyectoine, protease and siderophore production in all treatments and biofilm formation in water. On the other hand, ectoine increased lipase and hydrogen-cyanide production and biofilm formation in 300 mM NaCl and siderophore production in 150 mM. Hydroxyectoine had similar effects with little differences. <br /> <br />Discussion and conclusion: Ectoine and hydroxyectoine moderate the biocontrol reduction in presence of NaCl through positive effect on lipase and hydrogen-cyanide production and biofilm formation.مقدمه: باکتریهای پروبیوتیک گیاهی همچون سودومونادهای فلورسنت با سازوکارهایی از قبیل تولید متابولیتها و آنزیمها دارای سابقه طولانی در کنترل زیستی بیمارگرهای خاکزاد هستند. یکی دیگر از نقشهای مهم این باکتریها افزایش تحمل گیاه در مقابله با تنشهای محیطی است. اکتوئینها اسمولیتهایی است که نقش مهمی در تحمل به تنشهای اسمزی محیط ایفا میکند. <br /> <br /> مواد و روش ها: میزان تحمل 24 سویه باکتری پروبیوتیک گیاهی به شوری و دما تعیین و تعداد 6 سویه متحمل برای انجام آزمایشات بعدی انتخاب شد. در مرحله بعد، آزمون کشت متقابل قارچ فوزاریوم سولانی و باکتریهای رشد یافته در حضور اکتوئین و هیدروکسیاکتوئین به همراه سه غلظت کلرید سدیم انجام و یک سویه از سودوموناس فلورسنس (UTPF5) انتخاب شد. در نهایت، تأثیر اکتوئین، هیدروکسیاکتوئین و سه غلظت مختلف نمک بر جمعیت باکتری، تولید لیپاز، پروتئاز، سیانید هیدروژن، سیدروفور و بیوفیلم تعیین شد. <br /> <br /> نتایج: در غلظت 300 میلیمولار کلرید سدیم، باکتری رشد یافته در حضور اکتوئین و هیدروکسیاکتوئین درصد بازدارندگی از رشد قارچ را نسبت به شاهد پنج برابر افزایش داد. شوری بر جمعیت باکتری در تیمارهای آب مقطر و اکتوئین، تولید سیانید هیدروژن در هر سه تیمار و تشکیل بیوفیلم در تیمارهای اکتوئین و هیدروکسیاکتوئین تأثیر مثبت و بر جمعیت باکتری در تیمار هیدروکسیاکتوئین، تولید پروتئاز و سیدروفور در هر سه تیمار و تشکیل بیوفیلم در آب مقطر تأثیر منفی داشت. از طرف دیگر اکتوئین جمعیت باکتری، تولید لیپاز و تولید سیانید هیدروژن را در هر سه غلظت کلرید سدیم، تولید سیدروفور را در غلظت 150 میلیمولار و تشکیل بیوفیلم را در غلظت 150 و 300 میلیمولار افزایش و تولید پروتئاز را در هر سه غلظت کلرید سدیم و تشکیل بیوفیلم را در محیط بدون نمک کاهش داد. هیدروکسیاکتوئین تأثیراتی شبیه به اکتوئین با تفاوتهای جزیی داشت. <br /> <br /> بحث و نتیجه گیری: اکتوئین و هیدروکسیاکتوئین با تأثیر بر تولید لیپاز، سیانید هیدروژن و تشکیل بیوفیلم موجب تعدیل کاهش کنترل زیستی ایجاد شده در اثر شوری میشوند. https://bjm.ui.ac.ir/article_20367_57463abdefe9f9308b05e4c387b56697.pdfدانشگاه اصفهانزیست شناسی میکروبی3060-764751720160521Investigation of the effect of glucose syrup and brown sugar as low-cost substrate for lipid production by Mortierella alpine CBS 754.68بررسی اثر شربت گلوکز و شکر قهوهای به عنوان سوبسترا ارزان قیمت در تولید روغن توسط گونه قارچی Mortierella alpina CBS 754. 6849602036810.22108/bjm.2016.20368FAسعیدمنتظریکارشناس ارشد علوم و صنایع غذایی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد آیت الله آملی، آمل، ایرانحمیدرضاصمدلوئیاستادیار صنایع غذایی، دانشگاه صنعتی شاهرود، ایرانحامیکابوسیاستادیار میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد آیت الله آملی، آمل، ایرانJournal Article20161004<strong>Introduction:</strong>Arachidonic acid is an important essential fatty acid in human nutrition. The filamentous fungus <em>Mortierella alpina</em> has been identified as a promising producer of arachidonic acid. <em>Mortierella alpine</em> can accumulate up to 40% (w/w) lipid, of which up to 40% can be arachidonic acid.
<strong>Materials and methods:</strong> <em>Mortierella alpina</em> CBS 754.68 was cultivated in low cost substrate such as glucose syrup, brown sugar and starch for lipid and arachidonic acid production<strong>. </strong>The reduced sugar, total lipids and content of ARA were determined by dinitrosalicylic acid method, soxhlet and Gas chromatography–mass spectrometry (GC-MS) respectively.
<strong>Results:</strong> The carbon sources were applied at 70 g/l and nitrogen source (soybean powder) at 10 g/lit. The results showed that lipid in dry biomass in glucose syrup, starch and brown sugar media were obtained 32, 25 and 13 % w/w respectively. The arachidonic acid contents of lipid in the glucose syrup, starch and brown sugar media were 41, 33 and 31 % w/w respectively.
<strong>Discussion and conclusion:</strong> Lipidfatty acid compositions areaffected by the growth of microorganism. Cell membrane fatty acids such as stearic acid and oleic acid increased substantially concomitant with increases in the amount of biomass. Biomass and oil production efficiency fell due to inappropriate brown sugar medium.مقدمه: آراشیدونیک اسید یک اسید چرب ضروری مهم در رژیم غذایی است. قارچ رشته ای مورتیرلا آلفینا منبع مناسبی برای تولید آراشیدونیک اسید شناخته شده است. برخی از گونههایی این قارچ میتوانند بیش از 40 درصد چربی در خود ذخیره کنند که بیشتر از 40 درصد آن را آراشیدونیک اسید تشکیل میدهد. <br /> <br /> مواد و روش ها: در پژوهش حاضر، از منابع کربنی ارزان قیمت گلوکز مایع، شکر قهوهای و نشاسته برای تولید روغن و آراشیدونیک اسید از گونه قارچی مورتیرلا آلپینا سی بی اس 68/754 استفاده شد. قند احیا به روش دینیتروسالسیلیک اسید (DNS)، روغن با استفاده از دستگاه سوکسله و نوع اسید چرب با استفاده از دستگاه گاز کروماتوگرافی جرمی اندازهگیری شد. <br /> <br /> نتایج: منابع کربنی به جز منبع کربنی نشاسته بر اساس قند احیا در سطح 70 گرم در لیتر و پودر سویا در همه نمونهها در سطح 10 گرم در لیتر تنظیم شد. نتایج نشان داد که میزان درصد روغن در توده زیستی به ترتیب در محیطهای گلوکز مایع 32، نشاسته 25 و شکر قهوهای 13 و درصد آراشیدونیک اسید در روغن به ترتیب در محیطهای گلوکز مایع 37، نشاسته 33 و شکر قهوهای 31 بهدست آمد. <br /> <br /> بحث و نتیجه گیری: اجزای اسید چرب تشکیل دهنده روغن تحت تاثیر رشد میکروارگانیسم است. افزایش رشد توده زیستی، اسیدهای چرب ساختاری روغن مانند استئاریک اسید و اولئیک اسید را افزایش داد. شرایط نامناسب محیط کشت باعث شد بازده تولید توده زیستی و روغن کاهش یابد. https://bjm.ui.ac.ir/article_20368_dee94153b9fe5146e0092fcf6ce9e6ae.pdfدانشگاه اصفهانزیست شناسی میکروبی3060-764751720180408Isolation and identification of crude oil degrading bacteria from gastropod Haustrum scobina collected from Persian Gulf
(Bandar Abbas Shoreline provenance)جداسازی و شناسایی باکتری های تجزیه کننده نفت خام از شکم پا Haustrum scobina جمع آوری شده از خلیج فارس (ناحیه ساحلی بندرعباس)61722036910.22108/bjm.2016.20369FAزینببیاتدانشجوی کارشناسی ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه شهید باهنر، کرمان، ایرانمهدیحسن شاهیاندانشیار میکروبیولوژی، دانشگاه شهید باهنر، کرمان، ایرانمجیدعسکریاستادیار زیست شناسی دریا، دانشگاه شهید باهنر، کرمان، ایرانJournal Article20180408<strong>Introduction:</strong>Biodegradation is a good alternative rather than chemical and physical methods for cleaning oil contaminated areas. Several factors like crude oil concentration, biosurfactant production, salinity and incubation time affect the biodegradation. <br /><strong>Materials and methods:</strong> In this study, seawater sample and gastropod were collected from Persian Gulf. To isolate oil degrading bacteria from collected samples, ONR7a medium was used. The strains that had more growth and higher oil removal were selected and identified. The factors such as the effect of different concentrations of oil, incubation time, mixed cultures and salinity on the biodegradation were investigated. <br /><strong>Results:</strong> Six crude oil degrading bacteria were isolated. Between these bacteria 2 strains were selected based on higher oil removal. These strains belonged to the genus <em>Vibrio</em> and <em>Halomonas</em><em>.</em>Strains with higher Emulsification activity produce more biosurfactant and have higher oil biodegradation. Growth and oil degradation have increment pattern by prolonging the incubation time. Mixed culture of <em>Vibrio</em> and <em>Halomonas </em>strains have higher rates of degradation rather than culturing with one of them. Increase in crudeoil concentration to 2.5% caused reduction in growth of bacteria and degradation of oil. <br /><strong>Discussion and conclusion:</strong> The results of this study show that crude oil degrading bacteria have high diversity in Persian Gulf. These bacteria have higher capability for oil degradation thus they can be used for remediation of oil contaminated areas.<strong>مقدمه:</strong> تجزیه زیستی یک جایگزین خوب نسبت به روشهای شیمیایی و فیزیکی برای پاکسازی مناطق آلوده به نفت است. عوامل متعددی بر تجزیه زیستی شامل: غلظت نفت خام، تولید بیوسورفکتانت، شوری و زمان انکوباسیون تاثیر میگذارند. هدف از پژوهش حاضر، شناسایی و جداسازی باکتریهای تجزیه کننده نفت از شکمپا و بررسی اثر تولید بیوسورفکتانت، غلظتهای مختلف نفت، زمان انکوباسیون، کشت مخلوط و شوری بر تجزیه نفت توسط باکتریهای تجزیه کننده است. <br /> <strong>مواد و روش ها:</strong> در این پژوهش، از آب و شکمپایان خلیج فارس نمونهبرداری شد. برای جداسازی باکترىهاى تجزیه کننده نفت خام از نمونههای جمعآوری شده، محیط کشت ONR7a استفاده شد. سویههایی که رشد و حذف نفت بالاترى داشتند انتخاب و شناسایی شدند. تولید بیوسورفکتانت، اثر غلظتهای مختلف نفت، زمان انکوباسیون، کشت مخلوط و شوری بر میزان تجزیه زیستی بررسی شد. <br /> <strong>نتایج:</strong> در مجموع 6 کلونی که قادر به تجزیه نفت خام بودند، جداسازی شد. 2 سویه بر اساس حذف نفت بیشتر و فعالیت امولسیونکنندگی بیشتر انتخاب شد. این سویهها به جنسهای <em>Vibrio</em>و<em>Halomonas</em>تعلق داشتند. فعالیت امولسیونکنندگی و میزان تجزیه نفت برای سویه <em>Vibrio alginolyticus</em> به ترتیب 4/58 و 58/67 درصد و برای سویه <em>Halomonas ps</em> به ترتیب 6/11و 44/51 درصد بود. بنابراین، میتوان نتیجه گرفت سویههایی که دارای فعالیت امولسیونکنندگی بیشتری میباشند، بیوسورفکتانت بیشتری تولید کرده و قابلیت حذف نفت بالاتری دارند. میزان رشد و تجزیه نفت با طولانی شدن دوره انکوباسیون، افزایش یافته است. همچنین، مشاهده شد کشت مخلوط سویههای <em>Vibrio</em>و<em>Halomonas</em> میزان بالاتری از تجزیه را نسبت به کشت آنها به تنهایی دارد و با افزایش غلظت نفت از 5/2 درصد به بعد میزان رشد باکتری و تجزیه نفت کاسته شده است. بهینه رشد این سویه در 20 تا80 گرم در لیتر سدیمکلرید است و در غلظتهای بالاتر نمک، میزان رشد کاهش یافته است. <br /> <strong>بحث و نتیجه گیری:</strong> بررسیهای انجام شده نشان داد که باکتریهای موجود در خلیج فارس از تنوع زیاد با توان تجزیه نفت بالا برخوردار هستند و میتوان از آنها برای پاکسازی مناطق دریایی آلوده به نفت استفاده کرد. https://bjm.ui.ac.ir/article_20369_280725f92fc8133839c1434fa3cc3cca.pdfدانشگاه اصفهانزیست شناسی میکروبی3060-764751720180408Isolation and identification of the acetonitrile-degrading Pseudomonas from the Ab-anbar-e Ganjali Khan in Kermanجداسازّی و شناسایی سویه های سودوموناس تجزیه کننده استونیتریل از آب انبار گنجعلی خان کرمان73862037010.22108/bjm.2016.20370FAنرجسرمضانی پوردانشجوی کارشناسی ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه شهید باهنر کرمان، ایرانارسطوبدویی دلفارددانشیار بیوشیمی، دانشگاه شهید باهنر کرمان، ایرانعبدالحمیدنمکی-شوشتریدانشیار ژنتیک، دانشگاه شهید باهنر کرمان، ایرانزهراکرمیاستادیار بیوفیزیک، دانشگاه شهید باهنر کرمان، ایرانJournal Article20180408Introduction: Nitriles are toxic and hazardous compounds for all organisms which are produced enormously by human being and cause environment pollution. Biodegradation is the best method for Nitrile elimination in sewage. The aim of this study was isolation and identification of native bacteria Acetonitrile-degrading from the sewage of the city of Kerman. <br /> <br />Materials and methods: The enrichment and screening of Acetonitrile degrading bacteria was performed in a specific medium containing 1 % Acetonitrile as sole carbon and nitrogen source. Enzyme activity and ammonium production was determined in growth medium using a modification of the phenol/hypochlorite method. Identification of the isolates was undertaken using microbial - biochemical and molecular tests. The optimization of enzyme production was examined. The amount of nitrile and acid were also determined by gas chromatography. <br /> <br />Results: Among three isolated nitrile hydrolyzing producing species (FA3, FA8 and AB19), FA8 isolate showed maximum enzyme productivity. The results of characteristic tests showed that these bacteria belonged to the Pseudomonas sp. Moreover, 16S rRNA sequencing and phylogenetic analyses exhibited that FA11, FA8 and AB19 strains were similar to Pseudomonas Otitidis and Pseudomonas geniculate with 99, 100% homology, respectively. Results of medium optimization of Pseudomonas FA8 strain showed that glucose (10 gL-1) and yeast extract (5 gL-1) in neutral medium strongly supported enzyme production. Gas chromatography results showed that FA8 produced 58% acetic acid at 48 h of incubation. <br /> <br />Discussion and conclusion: The results demonstrated that Pseudomonas FA8 isolated bacterium is a suitable candidate for degradation of Acetonitrile. This bacterium could be used for treatment of industrial wastewater and sites that contaminated with Acetonitrile.مقدمه: نیتریلها ترکیباتی سمی و بسیار خطرناک برای موجودات زنده هستند که بهطور گسترده توسط بشر تولید و موجب آلودگی محیطزیست میشوند. بهترین روش برای تجزیه نیتریلهای موجود در فاضلاب، تجزیه زیستی است. هدف اصلی پژوهش حاضر، جداسازی و شناسایی باکتریهای تجزیهکننده استونیتریل از فاضلاب شهری در محل آب انبارهای کرمان است. <br /> <br /> مواد و روش ها: برای غنیسازی و جداسازی باکتریهای تجزیهکننده استونیتریل از محیط کشت اختصاصی حاوی 1 درصد استونیتریل به عنوان تنها منبع کربن و نیتروژن استفاده شد. فعالیت آنزیم و تولید آمونیاک در محیط کشت توسط روش فنل- هیپوکلریت سنجیده شد. باکتریهای جدا شده توسط آزمونهای بیوشیمیایی- میکروبی و مولکولی شناسایی شدند. بهینهسازی شرایط تولید آنزیم در حضور منابع مختلف کربن، نیتروژن و اسیدیته بررسی و مقدار نیتریل و اسید حاصل توسط کروماتوگرافی گازی تعیین شد. <br /> <br /> نتایج: از بین سه جدایه مولد نیتریل هیدرولاز با عنوان FA11، FA8، AB19 جدایه FA8 بیشترین فعالیت آنزیمی را نشان داد. نتایج آزمونهای شناسایی جدایهها نشان داد که این باکتریها به جنس سودوموناس تعلق دارند. بررسی مولکولی ژن 16S rRNA نشان داد که جدایه FA11 و FA8 با سودوموناس اوتیتیدیس و جدایه AB19 با سودوموناس جنیکولاتا به ترتیب دارای 99 و 100 درصد همولوژی هستند. بررسی اثر منابع مختلف بر تولید آنزیم نشان داد که جدایه برتر سودوموناس FA8 با وجود گلوکز و عصاره مخمر در محیط کشت با اسیدیته خنثی دارای بیشترین مقدار تولید آنزیم است. نتایج کروماتوگرافی گازی نشان داد که FA8 پس از 48 ساعت انکوباسیون، 58 درصد استیکاسید تولید کرده است. <br /> <br /> بحث و نتیجه گیری: نتایج نشان داد که جدایه برتر FA8، گزینه مناسبی برای تجزیه استونیتریل است که میتواند برای تجزیه استونیتریل از پساب صنایع و مکان های آلوده، استفاده شود. https://bjm.ui.ac.ir/article_20370_d6f4689dbed814cf26a25d3080cd15c2.pdfدانشگاه اصفهانزیست شناسی میکروبی3060-764751720160521Preparation and Characterization of Escherichia coli Liposomes as a New Drug Delivery System to Colon Cancerتهیه و ارزیابی ویژگی لیپوزوم های اشریشیاکلی به عنوان یک سیستم دارو رسانی نوین به سلول های سرطانی کولون87962037110.22108/bjm.2016.20371FAمحمدکارگردانشیار میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد جهرم، جهرم، ایرانسمیههندالیدانشجوی دکتری نانوتکنولوژی دارویی، مرکز تحقیقات فناوری نانو، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز، ایراناسکندرمقیمی پوراستاد فارماسیوتیکس، مرکز تحقیقات فناوری نانو، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز، ایرانزهرارمضانیدانشیار شیمی تجزیه، مرکز تحقیقات فناوری نانو، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز، ایرانJournal Article20161004Introduction: Liposomes are spherical vesicles composed of concentric phospholipid bilayers that can entrap hydrophilic, hydrophobic drugs. Liposomes can be prepared from natural phospholipids, synthetic lipids or bacterial lipids. The aim of this study was to formulate liposome from bacterial lipids and evaluate physicochemical properties. <br /> <br />Materials and methods: This study was performed experimentally on E.coli. The lipids were extracted from E.coli. using chloroform and methanol. Film method was used for preparing nano-systems and methylene blue was used as a drug model. Then their particle sizes were determined using particle sizer. The release methylene blue was carried out using dialysis membrane. Also, trailing them in cancer cells was evaluated by using carboxyfluorescein. <br /> <br />Results: The average particle size of E.coli. liposomal was 338 nm. Encapsulation efficiency was 53.33 ± 2.88% and the value of release after 24 h was 97.54% ± 0.00. Liposomes could deliver the carboxyfluorescein to cancer cells. <br /> <br />Discussion and conclusion: The results of this study demonstrated that bacterial liposome has probably a suitable nano-particle such as particle size and desirable loading and it is possible to use them as drug delivery system.مقدمه: لیپوزومها ذرات کروی شکل متشکل از دو لایه فسفولیپیدی و دارای ویژگی محصورسازی داروهای آب دوست و آب گریز هستند. امکان ساخت لیپوزومها با استفاده از فسفولیپیدهای طبیعی، لیپیدهای سنتزی و یا لیپیدهای باکتریایی وجود دارد. این پژوهش با هدف تولید لیپوزومها با استفاده از لیپیدهای غشایی باکتری اشریشیا کلی و ردیابی آن در رده سلولی HT29 انجام گرفت.<br /> <br /> مواد و روش ها: پژوهش حاضر به شکل تجربی بر روی اشریشیاکلی انجام شد. استخراج لیپید از باکتری اشریشیاکلی با استفاده از حلالهای کلروفرم و متانول انجام شد. برای تهیه ساختارهای نانو از روش لایه نازک و از متیلنبلو به عنوان یک مدل دارویی استفاده شد. سپس، اندازه ذرات با دستگاه نانوسایزر تعیین شد. آزادسازی متیلنبلو با استفاده از غشای دیالیز ارزیابی شد. همچنین، به منظور ردیابی در سلولهای سرطانی از کربوکسی فلورسین استفاده شد.<br /> <br /> نتایج: میانگین اندازه ذرات لیپوزومهای اشریشیاکلی 338 نانومتر بود. میزان بارگیری برای لیپوزومهای باکتریایی 88/2± 33/53 درصد و میزان آزادسازی لیپوزومها پس از 24 ساعت 00/0± 54/97 درصد بود. لیپوزومها توانایی انتقال کربوکسی فلورسین به سلولهای سرطانی را داشتند. <br /> <br /> بحث و نتیجه گیری: نتایج پژوهش نشان داد که لیپوزومهای باکتریایی ویژگیهای مناسب نانوذرات مانند اندازه ذرهای و بارگیری مطلوب را دارند و از این رو امکان استفاده از آنها به عنوان یک سیستم انتقال دارو وجود دارد.https://bjm.ui.ac.ir/article_20371_6d25035b29fc6995b361d099fd8ba659.pdfدانشگاه اصفهانزیست شناسی میکروبی3060-764751720160521Investigation of biosurfactant production by Bacillus pumilus 1529 and Bacillus subtilis WPIبررسی توانایی تولید بیوسورفکتانت توسط دو باکتری Bacillus pumilus 1529 و Bacillus subtilis WPI971102037210.22108/bjm.2016.20372FAشیلاخواجوی شجاعیدانشجوی کارشناسی ارشد شیمی و حاصلخیزی خاک، دانشگاه شهید چمران اهواز، ایرانعبدالامیرمعزیدانشیار شیمی و حاصل خیزی خاک، دانشگاه شهید چمران اهواز، ایراننعیمهعنایتی ضمیراستادیار خاک شناسی، دانشگاه شهید چمران اهواز، ایرانJournal Article20161004Introduction: Biosurfactants are unique amphipathic molecules with extensive application in removing organic and metal contaminants. The purpose of this study was to investigate production of biosurfactant and determine optimal conditions to produce biosurfactant by Bacillus pumilus 1529 and Bacillus subtilis WPI. <br /> <br />Materials and methods: In this study, effect of carbon source, temperature and incubation time on biosurfactant production was evaluated. Hemolytic activity, emulsification activity, oil spreading, drop collapse, cell hydrophobicity and measurement of surface tension were used to detect biosurfactant production. Then, according to the results, the optimal conditions for biosurfactant production by and Bacillus subtilis WPI was determined. <br /> <br />Results: In this study, both bacteria were able to produce biosurfactant at an acceptable level. Glucose, kerosene, sugarcane molasses and phenanthrene used as a sole carbon source and energy for the mentioned bacteria. Bacillus subtilis WPI produced maximum biosurfactant in the medium containing kerosene and reduced surface tension of the medium to 33.1 mN/m after 156 hours of the cultivation at 37°C. Also, the highest surface tension reduction by Bacillus pumilus 1529 occurred in the medium containing sugarcane molasses and reduce the surface tension of culture medium after 156 hours at 37°C from 50.4 to 28.83 mN/m. <br /> <br />Discussion and conclusion: Bacillus pumilus 1529 and Bacillus subtilis WPI had high potential in production of biosurfactant and degradation of petroleum hydrocarbons and Phenanthrene. Therefore, it could be said that these bacteria had a great potential for applications in bioremediation and other environmental process.مقدمه: بیوسورفکتانتها، مولکولهای دوگانه دوست منحصر به فردی هستند که کاربرد وسیعی در حذف آلودگیهای آلی و فلزی محیطزیست دارند. هدف از پژوهش حاضر، بررسی و تعیین شرایط بهینه تولید بیوسورفکتانت توسط دو باکتری Bacillus pumilus 1529 و Bacillus subtilis WPI است. <br /> <br /> مواد و روش ها: در این پژوهش، اثر منبع کربن، دما و زمان گرماگذاری بر تولید بیوسورفکتانت بررسی شد. بهمنظور تشخیص تولید بیوسورفکتانت از روشهای کمی و کیفی غربالگری، مانند همولیز آگار خوندار، روش پراکنش نفت، روش فروپاشی روغن، سنجش فعالیت امولسیونکنندگی، سنجش آبگریزی سلول و اندازهگیری کشش سطحی استفاده شد. سپس، با توجه به نتایج حاصل بهترین شرایط تولید بیوسورفکتانت توسط دو باکتری<br /> Bacillus pumilus 1529 و Bacillus subtilis WPI تعیین شد. <br /> <br /> نتایج: در این پژوهش، هر دو باکتری قادر به تولید بیوسورفکتانت در سطح قابل قبولی بودند. از میان چهار منبع کربن مورد بررسی گلوکز، نفت سفید، ملاس نیشکر و فنانترن بهعنوان منبع کربن و انرژی توسط این دو باکتری استفاده شدند. باکتری Bacillus subtilis WPI بیشترین کاهش کشش سطحی را در منبع کربن نفت سفید پس از 156 ساعت و در دمای 37 درجه سلسیوس نشان داد و توانست کشش سطحی را تا 3/0± 1/33 (میلینیوتن بر متر) کاهش دهد. بیشترین کاهش کشش سطحی توسط باکتری Bacillus pumilus 1529 در محیط حاوی ملاس نیشکر حاصل شد. کشش سطحی نمونه شاهد بدون باکتری حاوی ملاس معادل 5/1± 4/50 (میلینیوتن بر متر) بود که این سویه توانست پس از 156 ساعت و در دمای 37 درجه سلسیوس کشش سطحی محلول را تا 83/22 (میلینیوتن بر متر) کاهش دهد. <br /> <br /> بحث و نتیجه گیری: باکتری Bacillus pumilus 1529 و Bacillus subtilis WPI قابلیت بالایی برای تولید بیوسورفکتانت و تجزیه هیدروکربنهای نفتی و فنانترن دارند. بنابراین، میتوان گفت این دو باکتری قابلیت استفاده در زیست پالایی و دیگر کاربردهای زیستمحیطی و بیوتکنولوژی را دارا هستند. https://bjm.ui.ac.ir/article_20372_b5a28b6ea6a42105eaa4ce7f1ec40ed8.pdfدانشگاه اصفهانزیست شناسی میکروبی3060-764751720160521Effects of the surfactant Tween 80 on the growth and dibenzothiophene utilization by Exophiala spinifera isolated from oil- contaminated soilبررسی اثر سورفکتانت توئین 80 بر رشد و مصرف دیبنزوتیوفن توسط قارچ اگزوفیالا اسپینیفرا جداسازی شده از خاک آلوده به نفت1111202037310.22108/bjm.2016.20373FAفاطمهعلمیکارشناسی ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه اصفهان، ایرانزهرااعتمادی فرگروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه اصفهانگیتیامتیازیاستاد میکروبیولوژی، دانشگاه اصفهان، ایرانJournal Article20161004Introduction: Oil is one of the most important energy sources that contain variety of organosulfur compounds that are combustible and can produce sulfur dioxide which will cause pollution over the atmosphere and the soil. Dibenzothiophene (DBT) is often used as a model for biodesulfurization studies and surfactant Tween80 increases the solubility of DBT in water that leads to higher consumption by microorganisms. <br /> <br />Materials and methods: DBT specific UV spectrophotometry at a wavelength of 323 nm was used to evaluate the ability of isolated Exophiala spinifera fungus in removal of DBT. The effect of various concentrations of surfactant Tween80 on the growth of the fungus and DBT utilization was studied. <br /> <br />Results: Exophiala spinifera was able to remove 100% DBT after 7 days of incubation at 30 ° C and 180 rpm shaking. The effect of different concentrations of surfactant Tween80 on growth and DBT utilization by this fungus was examined and it was observed that the presence of surfactant in the culture medium increased the growth and removal of DBT, therefore the amount of DBT utilized with 0.4% concentration of the surfactant was about 30% more than that utilized without surfactant. However, higher concentrations of surfactant Tween80 decreased the growth and consumption of DBT by fungi. <br /> <br />Discussion and conclusion: Exophiala spinifera was isolated from oil contaminated soil and able to utilize toxic compound DBT as a sulfur source in the presence of other carbon sources such as glucose. So this isolated strain could be a good candidate for the petroleum desulfurization and it is the first report about desulfurization of DBT by fungus Exophiala spinifera. Growth and removal of DBT by fungus increased in the presence of surfactant Tween80. It can be concluded that the surfactant increases the total DBT transfer between the organic and aqueous phases and has a potential application in DBT bioremediation system by the studied fungus biocatalyst.مقدمه: نفت یکی از مهمترین منابع تولید انرژی است که حاوی انواعی از ترکیبات آلی گوگرددار است. در طول سوختن این ترکیبات اکسید گوگرد تولید شده و آلودگی اتمسفر و خاک را سبب میشود. دیبنزوتیوفن به عنوان یک مدل برای انجام آزمایشهای گوگردزدایی زیستی به کار میرود، و سورفکتانت توئین 80 موجب افزایش حلالیت این ترکیب سمی شده و طی فرآیند گوگردزدایی زیستی به میزان بیشتری توسط میکروارگانیسم مصرف میشود.<br /> <br /> مواد و روش ها: برای بررسی توانایی حذف دیبنزوتیوفن توسط قارچ اگزوفیالا اسینیفرای جداسازی شده از روش اسپکتروفوتومتری و جذب اختصاصی دیبنزوتیوفن در طول موج 323 نانومتر استفاده شد. سپس، تأثیر غلظتهای مختلف سورفکتانت توئین 80 بر رشد و مصرف دیبنزوتیوفن توسط این قارچ بررسی شد. <br /> <br /> نتایج: قارچ اگزوفیالا اسپینیفرا قادر به حذف 100 درصد دیبنزوتیوفن پس از 7 روز انکوباسیون در یک انکوباتور شیکردار با دور rpm 180 و دمای 30 درجه سانتیگراد بود. در این مطالعه، غلظتهای مختلف سورفکتانت توئین 80 بر رشد و فعالیت این قارچ مشاهده شد که حضور سورفکتانت در محیط کشت موجب افزایش رشد و کاهش بیشتر غلظت دیبنزوتیوفن میشود بهطوری که میزان مصرف دیبنزوتیوفن در غلظت 4/0 درصد از سورفکتانت نسبت به شاهد فاقد سورفکتانت 30 درصد افزایش یافت. البته غلظتهای بسیار بالای سورفکتانت توئین 80 (غلظت 1 میلیمولار) موجب کاهش رشد و مصرف دیبنزوتیوفن توسط قارچ یاد شده میشود.<br /> <br /> بحث و نتیجه گیری: قارچ اگزوفیالا اسپینیفرا مورد مطالعه در پژوهش حاضر از خاک آلوده به نفت جداسازی شده است که قادر به مصرف ترکیب سمی دیبنزوتیوفن به عنوان منبع گوگرد در حضور سایر منابع کربنی همانند گلوکز بوده است. بنابراین، سویه قارچی جداسازی شده میتوانند کاندیدای مناسبی برای گوگردزدایی از نفت باشد و این نخستین گزارش از توانایی گوگردزدایی DBT در قارچ اگزوفیالا است. رشد و حذف دیبنزوتیوفن توسط قارچ یاد شده در حضور سورفکتانت توئین 80 افزایش یافته است. پس بهطور کلی میتوان نتیجه گرفت که سورفکتانت افزایش انتقال دیبنزوتیوفن بین فاز آلی و آبی را به همراه دارد و قابل استفاده در سیستم پاکسازی زیستی دیبنزوتیوفن توسط بیوکاتالیست قارچی مورد مطالعه است.https://bjm.ui.ac.ir/article_20373_95a72315498db6192171de9203828259.pdfدانشگاه اصفهانزیست شناسی میکروبی3060-764751720160521Isolation and optimization of pectinase enzyme production one of useful industrial enzyme in Aspergillus niger, Rhizopus oryzae, Penicilium chrysogenumجداسازی و بهینه سازی تولید آنزیم پکتیناز یک آنزیم مفید صنعتی از قارچ های آسپرژیلوس نایجر، ریزوپوس اوریزه و پنیسیلیوم کریزوژنوم1211402037410.22108/bjm.2016.20374FAاکرمسنگلدانشجوی کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی میکروبی، دانشگاه اصفهان، ایرانماندانابهبهانیدانشیار بیوتکنولوژی میکروبی، دانشگاه اصفهان، ایران0000-0003-3240-2672Journal Article20161004Introduction: Pectinase enzyme is one of the most important industrial enzymes which isolated from a wide variety of microorganisms such as bacteria and filamentous fungi. This enzyme has been usually used in the fruit and textile industry. In this study, the isolation and optimization of pectinase-producing fungi on decaying rotten fruits were studied. <br /> <br />Materials and methods: Isolation and screening of pectinase producing fungi performed through plate culture on pectin medium and staining with Lugol's iodine solution. The best strains were identified by ITS1, 4 sequencing as Aspergillus fumigatus, Rhizopus oryzae, Penicilium chrysogenum. The enzyme production was optimized by application of the five factorial design, each at three levels. These factors are carbon sources (whey, glucose and stevia), ammonium sulfate, manganese sulfate, temperature, and pH. Pectinase concentration was measured by the Miller method. <br /> <br />Results: The results indicate that optimum condition for enzyme production for three fungi strains was obtained at 32 °C, pH = 6, 3g / L manganese sulfate, 2.75g / L of ammonium sulfate and 10g / L of each carbon source. The best experiment in obtaining the optimum enzyme contained 1.328 mg / ml of glucose for Aspergillus niger 1.284 and 1.039 mg / ml of whey for Rhizopus oryzae and Penicilium chrysogenum. Molecular weight of enzyme was about 40 and 37 kDa which was obtained by SDS- PAGE. <br /> <br />Discussion and conclusion: The results indicate that three strains could grow in a wide range of carbon source, pH and temperature, which could be a good candidate for industrial application.مقدمه: آنزیم پکتیناز یکی از مهمترین آنزیمهای صنعتی جهان محسوب میشود که از طیف وسیعی از میکروارگانیسمها مانند باکتریها و قارچهای رشتهای جداسازی میشود. این آنزیم استفادههای زیادی در صنایع آبمیوهسازی، نساجی و غیره دارد. در این پژوهش، جداسازی و بهینهسازی قارچهای تولید کننده آنزیم پکتیناز از میوههای پوسیده سیب و پرتقال بررسی شد.<br /> <br /> مواد و روش ها: جداسازی قارچهای تولید کننده آنزیم پکتیناز با استفاده از محیط کشت پکتیندار و با رنگ آمیزی لگول انجام شد. 3 گونه از بهترین سویهها توسط روش مولکولی توالی ITS1,4 شناسایی شد و بهینهسازی تولید آنزیم از این قارچ توسط طرح فاکتوریل در حضور 5 متغیر با 3 سطح در نظر گرفته شد. این 5 متغیر شامل منابع کربنی (آب پنیر، گلوکز و استویا) به همراه سولفات آمونیوم، سولفات منگنز، دما و اسیدیته) در 3 آزمایش جداگانه انجام شد. اندازهگیری غلظت آنزیم پکتیناز با روش کلوریمتریک (میلر) انجام شد.<br /> <br /> نتایج: نتایج نشان داد که شرایط بهینه تولید آنزیم توسط 3 سویه برتر به نام آسپرژیلوس نایجر، پنیسیلیوم کریزوژنوم و ریزوپوس اوریزه در دمای 32 درجه، اسیدیته 6، غلظت 3 گرم بر لیتر سولفات منگنز، 75/ 2 گرم بر لیتر از سولفات آمونیوم و غلظت 10 گرم بر لیتر منابع کربن آب پنیر، استویا و گلوکز است. بالاترین میزان تولید آنزیم در شرایط یاد شده در حضور گلوکز با میزان 328/1میلیگرم بر میلیلیتر برای آسپرژیلوس نایجر و 284/1 و 039/1 میلیگرم بر میلیلیتر در حضور آب پنیر برای ریزوپوس اوریزه و پنیسیلیوم کریزوژنوم مشاهده شد. وزن مولکولی این آنزیم مطابق روش SDS-Page 40 و 37 کیلودالتون بهدست آمد.<br /> <br /> بحث و نتیجه گیری: نتایج پژوهش حاضر نشان داد که 3 سویه قادر به تولید آنزیم در حضور منابع مختلف کربن و دامنه وسیعی از اسیدیته و دماست. همچنین، نتایج پژوهش نشان داد که این سویه ها کاندید مناسبی برای کاربرد در صنعت می باشند.https://bjm.ui.ac.ir/article_20374_1791447586a282c5e21b1f0da43b61d1.pdfدانشگاه اصفهانزیست شناسی میکروبی3060-764751720160521Studying of Biomineralization on Badab Sourt travertine deposit spring, Kiasar, Mazandaran Provinceبررسی معدنی شدن زیستی در نهشته های تراورتنی چشمه بادآب سورت، کیاسر، مازنداران1411582037510.22108/bjm.2016.20375FAجوادخنشادانشجوی کارشناسی ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه تهران، ایرانمحمد علیآموزگاردانشیار میکروبیولوژی، دانشگاه تهران، ایرانمحسنرنجبراناستادیار زمین شناسی، دانشگاه تهران، ایرانJournal Article20161004Introduction: Travertine results in the accumulation of calcium carbonate on karst springs, hot springs, small rivers and marshes. Badab Sourt is the travertine-maker spring that located in Mazandaran province and is the second natural place in Iran. It has two springheads with different characteristics and different colors and different sediments that give unique beauty to spring. Travertine is a good model to study the relationship between environment and microorganisms. This study centered on the influence of microorganisms on precipitation of calcium carbonate and isolation of microorganisms that have precipitation potential. <br /> <br />Materials and methods: Here, to assess effects of microorganisms on mineralization were used microscopic and culture methods; from stone samples, photos have gotten with SEM and polarizing microscope and from water sample bacteria were isolated. Mineralization function of bacteria was investigated with culturing them on B4 medium and mineralization potential was approved by polarizing microscope. <br /> <br />Results: SEM photos showed microorganisms have effect on mineralization and can act as a nucleus in beginning of crystal production. Finally, five strains Bss-3, Bsw-28d, Bss-11a, Bsw-1c1, and Bsw-39b were isolated, which have ability to precipitate calcium carbonate. In between strain Bss-3 that has 99.6% similarity with taxon Labrenzia aggregate IAM 12614T was the first report that has the ability to precipitate calcium carbonate and among the strains, strain Bsw-28d with precipitation of 45.6 mg / ml CaCO3 was the best strain. <br /> <br />Discussion and conclusion: Microorganisms are important in the formation and evolution of their surrounding environments, thereby native microbes must be concerned for conserving and restoring the environments.مقدمه: نهشته های تراورتنی حاصل تجمع کربنات کلسیم در چشمههای کارستی، چشمههای آبگرم، رودخانههای کوچک و باتلاقهاست. چشمه تراورتن ساز بادآب سورت در استان مازندران واقع شده و دومین اثر طبیعی ایران است. این چشمه دارای دو سرچشمه با ویژگیهای متفاوت است و وجود رنگهای متنوع به علت رسوبات مختلف زیبایی منحصر به فردی به چشمه میدهد. تراورتنها مدل مناسبی برای بررسی رابطه محیط- میکروارگانیسمها هستند، این مطالعه تمرکز روی بررسی تاثیرگذاری میکروارگانیسمها در رسوبگذاری کربنات کلسیم و جداسازی باکتریهای دارنده پتانسیل رسوبگذاری داشت.<br /> <br /> مواد و روش ها: برای بررسی تأثیر میکروارگانیسمها بر رسوبگذاری در این جا از روشهای میکرسکوپی و کشت استفاده شد، از نمونههای سنگی تصاویر میکرسکوپی با استفاده از میکرسکوپ الکترونی و پلاریزان تهیه شد و باکتریها از طریق روشهای کشت از نمونه آب جداسازی شدند. فعالیت رسوبگذاری باکتریها از طریق کشت روی محیط B4 بررسی شد و تأیید رسوبگذاری با میکرسکوپ پلاریزان انجام شد.<br /> <br /> نتایج: تصاویر میکرسکوپ الکترونی نشان میدهد که میکروارگانیسمها در رسوبگذاری تاثیر گذار هستند؛ به شکلی که میتوانند به عنوان هسته اولیه عمل کنند. در نهایت، 5 سویه Bss-3، Bsw-28d، Bss-11a، Bsw-1c1 و Bsw-39b جداسازی شدند که توانایی رسوب کربنات کلسیم را داشتند. در این بین، سویه Bss-3 که شباهت 6/99 با تاکسون Labrenzia aggregate IAM 12614T را داشت. این توانایی برای نخستین بار برای این جنس گزارش شده است و در بین سویهها، سویه Bsw-28d با رسوب دادن 45 میلیگرم بر میلیلیتر کربنات کلسیم بهترین سویه بود.<br /> <br /> بحث و نتیجه گیری: میکروارگانیسمها در تشکیل و تکامل محیط اطرافشان اهمیت دارند؛ در نتیجه برای حفظ و احیای یک محیط باید به میکروبهای بومی آن توجه کرد.https://bjm.ui.ac.ir/article_20375_966a992df8c7319f3bb6837ac92f3dc8.pdfدانشگاه اصفهانزیست شناسی میکروبی3060-764751720160521The study of Antimicrobial and Anti-adhesive effect of ProbioticLactobacilli on Uropathogenic Escherichia coli (UPEC)بررسی اثر ضد میکروبی و ضد اتصالی لاکتوباسیلوس های پروبیوتیکی بر باکتری اشریشیاکلی یوروپاتوژنیک (UPEC)1591702037610.22108/bjm.2016.20376FAمهساصدریکارشناس ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد دامغان، دامغان، ایراننازیلاارباب سلیمانیاستادیار میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد دامغان، دامغان، ایرانمحمد مهدیفرقانی فرداستادیار علوم سلولی و مولکولی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد دامغان، دامغان، ایرانJournal Article20161004Introduction: One of the most important factors in Urinary Tract Infection caused by Uropathogenic Escherichia coli, is the attachment of bacteria to the host cell surface. Thus, inhibition of bacterial attachment is the appropriate action to prevent infection. The aim of this study was to investigate the antimicrobial and especially anti adhesive characteristics of probiotic bacteria against Escherichia coli by using microbial techniques. <br /> <br />Materials and methods: In this study two strains of Lactobacillus acidophilus PTCC 1643 and Lactobacillus casei PTCC 1608 were used .40 Uropathogenic Escherichia coli were collected from Semnan province hospitals.20 samples with the more capability of biofilm production were selected for microbial tests. To evaluate the antimicrobial activity of complete culture and supernatant of probiotic lactobacilli, modified double layer method and dilution of supernatant were used, respectively. The mechanism of co- aggregation of lactobacilli with pathogens was examined. The microtitre plate method was used to detect anti-adhesive activity of Lactobacilli supernatant. <br /> <br />Results: The antimicrobial and anti-adhesive effects of probiotic lactobacilli on Uropathogenic Escherichia coli were confirmed in all tests. In this study, Lactobacillus casie with the growth inhibitory (42/7 mm) and anti-adhesive (46/7mm) effects were reported as a proper probiotic bacterium. <br /> <br />Discussion and conclusion: According to the results, the probiotic lactobacilli have spectacular effects to prevent attachment, biofilm formation and pathogenicity of UPEC, so using them to prevent and treat Urinary tract infection is a practical, reasonable and acceptable method.مقدمه: یکی از عوامل مهم در عفونتهای دستگاه ادراری ناشی از اشریشیاکلای یوروپاتوژنیک، چسبیدن باکتری به سطح سلول میزبان است. بنابراین، مهار اتصال باکتری، راهکاری مناسب برای مهار و پیشگیری از عفونت است. هدف از پژوهش حاضر، بررسی خواص ضد میکروبی و به ویژه ضد اتصالی پروبیوتیکها بر روی پاتوژن شایع دستگاه ادرای (اشریشیاکلی)، با استفاده از روشهای میکروبی است.<br /> <br /> مواد و روش ها: در پژوهش حاضر از دو سویه لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس PTCC 1643 و لاکتوباسیلوس کازهای PTCC 1608 استفاده شد. تعداد 40 باکتری اشریشیاکلی یوروپاتوژنیک از بیمارستانهای استان سمنان جمعآوری شد. 20 نمونه با بیشترین توانایی در تولید بیوفیلم، برای انجام آزمونهای میکروبی انتخاب شدند. به منظور بررسی آثار ضد میکروبی لاکتوباسیلوسها در حالت کشت کامل و مایع رویی کشت (سوپرناتانت)، به ترتیب از روشهای کشت دولایه اصلاح شده و رقتسازی سوپرناتانت استفاده شد. مکانیسم تجمعپذیری لاکتوباسیلوسها با پاتوژن مورد نظر بررسی شد. تشخیص فعالیت ضد اتصالی سوپرناتانت لاکتوباسیلوسها، با استفاده از روش میکروتیترپلیت 96 خانهای انجام شد.<br /> <br /> نتایج: در تمامی آزمونهای میکروبی بهکار رفته اثر ضد میکروبی و اثر ضد اتصالی لاکتوباسیلوسها بر باکتریهای اشریشیاکلی یوروپاتوژنیک تایید شد. لاکتوباسیلوس کازهای با اثر مهاری رشد (7/42 میلیمتر) و ضد اتصالی (7/46 درصد) بهعنوان باکتری ﭘروبیوتیک مناسبتر در این پژوهش گزارش شد.<br /> <br /> بحث و نتیجه گیری: با توجه به نتایج به دست آمده لاکتوباسیلوسهای پروبیوتیکی در جلوگیری از اتصال، تشکیل بیوفیلم و بیماریزایی باکتری اشرشیاکلی یوروپاتوژنیک دارای آثار چشمگیری هستند. بنابراین، استفاده از آنها برای پیشگیری و درمان عفونت دستگاه ادرای بهعنوان راهکاری مهم و عملی، منطقی و قابل قبول است.https://bjm.ui.ac.ir/article_20376_2952e33ca7188b426681e435df6a1113.pdfدانشگاه اصفهانزیست شناسی میکروبی3060-764751720160521Evaluation of the Escherichia coli (E.coli) Strains based on protein profiles obtained from traditional Ice cream in Isfahan Cityبررسی سویه های اشرشیاکلی (E.coli) بهدست آمده از بستنی سنتی بر اساس پروفایل پروتئینی در شهر اصفهان1711842037710.22108/bjm.2016.20377FAمریمرنجبرکارشناس ارشد علوم و صنایع غذایی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، ایرانرضاندائی نیادکترا تخصصی بیوتکنولوژی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، ایرانمحمدگلیاستادیار علوم و صنایع غذایی، دانشگاه آزاد اسلامی اصفهان (خوراسگان)، اصفهان، ایرانمصطفیمانیانکارشناس ارشد ایمونولوژی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، ایرانمحمد رضامراثیدانشیار آمار زیستی و اپیدمیولوژی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، ایرانمنصورفیضیکارشناس ارشد سم شناسی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، ایراننفیسهکارگرانکارشناس علوم و صنایع غذایی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، ایرانJournal Article20161004Introduction: Bacterial strains present in food products undergo different thermal processes such as coldness and warmth. Such cases cause a shock in bacteria and force the bacteria to produce proteins and partly, develop a change in the production of enzyme. This can give the strain a special characteristic, knowledge of this characteristic will contribute to a timely and more precise identification. <br /> <br />Materials and methods: During this time more than 100 samples have been examined, out of which, 48 Indol positive isolation samples were examined by phenotypic tests and sodium dodecyle sulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS- PAGE). <br /> <br />Results: – The results of numerical analysis of phenotypic characteristics and protein patterns showed that only 79% of the collected isolates (phenon 1 and 2) could be identified as E.coli compared with reference strains. E.coli strains from ice creams were showed some Variation in banding patterns. Major differences were observed in protein bands between 23.59 - and 20.79 -kDa molecular mass range which the isolates were compared with reference strains. <br /> <br />Discussion and conclusion: Our study concluded that food’s bacterial strains are influenced by temperatures in different processes and also it could stimulate the production of proteins or change the enzymes. Therefore, The reason of taking care of the issues is that changes in the proteins’ structures can lead to change in the biochemical properties, and finally this change can misguide us. Further research is being performed to characterize these atypical strains by molecular methods.مقدمه: باکتریهایی که در مواد غذایی حضور دارند، تحت تأثیر فرآیندهای مختلف دمایی نظیر سرما و گرما قرار میگیرند. این موارد باعث ایجاد شوک در باکتریها شده و آنها را وادار به تولید پروتئینها و بعضاً تغییراتی در تولید آنزیمها کرده که این امر میتواند ویژگی خاصی به آنها داده که اطلاع از این ویژگی در تشخیص به موقع و دقیقتر کمک کننده است. <br /> <br /> مواد و روش ها: در پژوهش حاضر، بیش از 100 نمونه به شکل تصادفی از نقاط مختلف شهر اصفهان جمعآوری و تعداد 48 جدایه اندول مثبت از آنها جداسازی شد. این جدایهها بر اساس آزمونهای فنوتیپی و الکتروفورز پروتئین ارزیابی شدند.<br /> <br /> نتایج: بر اساس آزمونهای بیوشیمیایی، با بهرهمندی از تحلیلهای عددی و دندروگرام ترسیم شده بر مبنی روش jacard، جدایهها در 8 گروه قرار گرفتند. این گروهها نتیجه تفاوت فنوتیپی بین استرینها و اختلاف آنها در استفاده از منابع کربنی مختلف بود. بنابراین، جدایههای گروه یک و دو به سویه اشرشیا کلی (معادل 79 درصد) تعلق داشتند. جدایههای بهدست آمده از بستنی در الگوی الکتروفورزی دارای دو باند پروتئینی در ناحیه 59/23 و 79/20 کیلو دالتون بودند، که از این لحاظ با جدایه استاندارد تفاوت داشتند. <br /> <br /> بحث و نتیجه گیری: به علت وجود تفاوتهای بیوشیمیایی و مولکولی، به ویژه در دو باند پروتئینی یاد شده در جدایههای بهدست آمده، در مقایسه با جدایه استاندارد، میتوان نتیجه گرفت جدایههای باکتریایی موجود در بستنی به علت آنکه تحت تاثیر فرآیندهای مختلف دمایی قرار میگیرند، تحریک به تولید پروتئینها و بعضاً تغییراتی در تولید آنزیمها شده، که میتواند ویژگی خاصی به این جدایهها داده، و در نهایت، باعث ابهام در تشخیص شود. بنابراین بررسیهای مولکولی بیشتری در این زمینه نیاز است انجام شود. https://bjm.ui.ac.ir/article_20377_a8832245ca095eb16ced194cf5a62d67.pdfدانشگاه اصفهانزیست شناسی میکروبی3060-764751720160521Screening and identification of efficient strain in selenium oxyanions sorption in order to biological wastewater treatmentغربال سازی و شناسایی سویه کارا در جذب اکسی آنیون های سلنیوم به منظور تصفیه زیستی فاضلاب1851982037810.22108/bjm.2016.20378FAفاطمهیعقوبی زادهکارشناس ارشد میکروبیولوژی، دانشگاه شهید چمران اهواز، ایرانمحمدرعایایی اردکانیاستاد میکروبیولوژی، دانشگاه شهید چمران اهواز، ایرانحسینذوالقرنیناستادیار بیوتکنولوژی، دانشگاه علوم و فنون دریایی خرمشهر، ایرانJournal Article20161004Introduction: Selenium is an element with antioxidant activities that plays roles in thyroid hormone homeostasis, immunity and also fertility. Nevertheless, selenium toxicity (selenosis) causes problems for humans such as abnormalities of the nervous system, gastrointestinal problems and hair loss. Thus, this study was performed with the aim of bacterial biosorbent isolation in order to remove selenium contaminant from wastewater. <br /> <br />Materials and methods: In this research, at first using modified Luria- Bertani agar (mLBA) medium with certain concentration of sodium selenate salt, isolation of bacterial isolates was done from three collected wastewater and sludge samples from Khouzestan industrial factories. After determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC), the sorption capacity and the percentage of metal removal efficiency (%RE) were investigated by atomic absorption spectrophotometer using metabolically active and inactive samples belonging to an efficient isolate. Identification was performed by morphological, biochemical and molecular methods. <br /> <br />Results: Among 73 attained bacterial isolates at the first stage, 8 selenate oxyanion resistant isolates were gathered. Among these, AMS1-S8 isolate with MIC= 600mM and MBC= 1200mM were selected for more studies. Attained results in sorption mechanism determination stage showed that the sorption capacity in metabolically active sample is more than the inactive samples. Based on the identification results, it is revealed that this isolate belongs to the Enterobacter genus. This isolate is deposited as accession JQ965667 in the GeneBank database. <br /> <br />Discussion and conclusion: The results showed that active biomass of selected isolate, have most sorption capacity and %RE and among the other isolates, have high partial resistance against selenate. Therefore, it can be a relatively ideal option for the bioremediation of polluted environments.مقدمه: سلنیوم، عنصری با فعالیتهای آنتیاکسیدانی است که در همئوستاز هورمون تیروئید، ایمنی و باروری نقش دارد. با وجود این، مسمومیت با سلنیوم (سلنوز) موجب ایجاد مشکلاتی برای انسان از جمله اختلالات سیستم عصبی، مشکلات معدی- رودهای و ریزش مو میشود. از این رو، این مطالعه با هدف غربالسازی جاذب زیستی باکتریایی مناسب بهمنظور حذف آلاینده سلنیوم از فاضلاب انجام شد. <br /> <br /> مواد و روش ها: در این پژوهش، در ابتدا با استفاده از محیط کشت لوریا برتانی آگار تغییر یافته (mLBA) با غلظت معینی از نمک سلنات سدیم، جداسازی جدایههای باکتریایی از سه نمونه پساب و لجن جمعآوری شده از کارخانجات صنعتی خوزستان، انجام شد. پس از تعیین حداقل غلظت مهاری (MIC) و حداقل غلظت کشندگی (MBC)، میزان جذب و درصد کارایی پاکسازی فلز (%RE) با استفاده از نمونههای فعال و غیر فعال متابولیسمی یکی از جدایههای کارا و توسط دستگاه اسپکتروفتومتر جذب اتمی بررسی شد. شناسایی، با روشهای ریختشناختی، بیوشیمیایی و مولکولی انجام شد. <br /> <br /> نتایج: از میان 73 جدایه باکتریایی بهدست آمده در مرحله اول، 8 جدایه مقاوم به اکسیآنیون سلنات بهدست آمد. در این میان جدایه AMS1-S8 بهترتیب با MIC و MBC معادل با 600 و 1200 میلیمولار برای مطالعات بیشتر انتخاب شد. نتایج بهدست آمده در مرحله تعیین مکانیسم جذب نشان داد که میزان جذب در نمونه فعال متابولیسمی از نمونههای غیر فعال بیشتر است. بر اساس نتایج شناسایی مشخص شد که این جدایه، به جنس Enterobacter تعلق دارد. این جدایه با شماره ثبت JQ818822 در بانک جهانی ژن، ثبت شده است. <br /> <br /> بحث و نتیجه گیری: نتایج نشان داد که زیست توده فعال جدایه منتخب، بیشترین میزان جذب و %RE را داشته و در میان سایر جدایهها، مقاومت نسبی بالایی در برابر سلنات دارد. بنابراین، میتواند گزینهای کمابیش ایدهآل برای اصلاح زیستی محیطهای آلوده باشد. https://bjm.ui.ac.ir/article_20378_ec53ad279ebcaba1f46741a336b94b31.pdf