دانشگاه اصفهان زیست شناسی میکروبی 3060-7647 13 50 2024 08 22 Purification of Fusobacterium nucleatum from periodontal pockets خالص سازی فوزوباکتریوم نوکلئاتوم از پاکت های پریودنتال دندانی 105 123 28650 10.22108/bjm.2024.140998.1589 FA فاطمه اسکندری ملایری کارشناسی ارشد ایمنی شناسی، دانشکده پژشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران مرضیه رضائی گروه ایمنی شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران تهمینه نریمانی استادیار گروه باکتری و ویروس شناسی، دانشکده پژشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران Journal Article 2024 04 09 Introduction: Fusobacterium nucleatum (F. nucleatum) is an anaerobic, gram-negative bacterium, morphologically an elongated bacillus with a sharp end belonging to the Bacteroidaceae. It is the normal flora of the mouth that is present in other organs in some diseases. Given the role of F. nucleatum in the creation and development of human diseases, it is very important to investigate its characteristics and functions. However, due to the obligate anaerobic nature of F. nucleatum, purification and long-term storage of the bacteria pose problems. The aim of this study is to find an optimal method for the purification of F. nucleatum to enable a detailed study of the functions and mechanisms of the bacteria to provide new therapeutic approaches to control or treat the diseases caused by F. nucleatum for future studies. Materials and Methods: Samples were taken from deep periodontal pockets of 16 patients using 40 size paper points with tryptic soy broth transfer medium (first method) and Columbia agar culture medium with gas pack type A and anaerobic jar (second method). The samples were then examined for the presence of F. nucleatum by macroscopic and microscopic observations, biochemical tests, PCR and sequencing. Results: The results showed that the tryptic soy broth transfer medium was not able to preserve and keep the bacteria alive, and the purified F. nucleatum was isolated by direct transfer to Columbia agar culture medium with gas pack type A and anaerobic jar. Discussion and Conclusion: Due to the obligate anaerobic nature of F. nucleatum, the use of transfer medium is not efficient for isolation due to the greater exposure of bacteria to air oxygen, and the optimal method for purification of F. nucleatum is the second sampling method. فوزوباکتریوم نوکلئاتوم (F. nucleatum) یک باکتری بی‌هوازی و گرم منفی و ازنظر ریخت‌شناسی باسیلی کشیده با انتهای تیز است که متعلق به خانوادهBacteroidaceae است. F. nucleatum فلور طبیعی دهان است؛ اما در برخی بیماری‌ها در سایر اندام‌ها نیز وجود دارد. با توجه به نقش F. nucleatum در ایجاد و توسعه بیماری‌های انسانی، بررسی ویژگی‌ها و عملکردهای آن بسیار مهم است. برای انجام چنین مطالعاتی باید امکان جداسازی باکتری از نمونه‌های مختلف وجود داشته باشد؛ اما به‌دلیل بی‌هوازی اجباری بودن F. nucleatum، خالص‌سازی و نگهداری طولانی‌مدت باکتری‌ها با مشکلاتی مواجه است. هدف از انجام این مطالعه دستیابی به روشی بهینه به‌منظور خالص‌سازی F. nucleatum است تا بتوان زمینة مطالعه دقیق عملکردها و مکانیسم‌های عمل باکتری به‌منظور ارائه رویکردهای درمانی جدید برای کنترل یا درمان بیماری‌های ایجادشده توسط F. nucleatum را برای مطالعات آینده فراهم کرد. با استفاده از paper point با سایز 40 از پاکت‌های پریودنتال عمیق 16 بیمار با استفاده از محیط انتقالی Tryptic Soy Broth (روش اول) و محیط کشت کلمبیا آگار همراه با گاز پک نوع A و جار بی‌هوازی (روش دوم) نمونه‌گیری انجام شد. سپس نمونه‌ها به‌منظور تأیید حضور F. nucleatum با مشاهدات ماکروسکوپی و میکروسکوپی، تست‌های بیوشیمیایی، تست PCR و توالی‌یابی بررسی شدند. نتایج نشان دادند محیط انتقالی Tryptic Soy Broth قادر به حفظ و زنده نگه داشتن باکتری نبوده است و F. nucleatum های خالص‌شده با انتقال مستقیم آنها به محیط کشت کلمبیا آگار همراه با گاز پک نوع A و جار بی‌هوازی جداسازی شدند. با توجه به بی‌هوازی اجباری بودن F. nucleatum، استفاده از محیط انتقالی به‌علت مواجهه بیشتر باکتری با اکسیژن هوا برای جداسازی کارآمد نیست و روش بهینه برای خالص‌سازی F. nucleatum دومین روش نمونه‌گیری است.

https://bjm.ui.ac.ir/article_28650_db0ae964fbd205c2d9da2d652bf969f2.pdf