دانشگاه اصفهان زیست شناسی میکروبی 3060-7647 1 2 2012 08 22 The effect of Staphylococcus aureus extraction factors on viability of neutrophils and monocytes in vitro اثرعوامل مترشحه استافیلوکوکوس اورئوس بر بقای نوتروفیل‏ها و مونوسیت‏ها در شرایط in vitro 23 36 19462 FA ناهیده افضل آهنگران مربی ایمنولوژی، دانشگاه ارومیه، ایران، نوروز دلیرژ استادیار ایمنولوژی، دانشگاه ارومیه، ایران، ملاحت احمدی دانشیار میکروبیولوژی، دانشگاه ارومیه، ایران Journal Article 2016 06 14 Introduction: Staphylococcus aureus exoproteins are known to have potent effects on cells of the immune system in human infections and their primary inhibitory effects in vivo on innate immune responses. The objective of this study was to determine the effects of bacterial extractions on viability of neutrophils and monocytes in the healthy and the infected cattle (mastitis). Materials and Methods: In order to isolate of neutrophils and monocytes, heparinized blood samples were taken from the healthy (n=5) and the infected cattles (n=5). Neutrophil and monocyte isolation was carried out using meglumine and histopaque compounds respectively. Secretory factors from Staphylococcus aureus ATCC23219 were extracted and its concentration assayed by Bradford method and were determined to be 400 μg/ml. The effect of different concentrations of the extract on viability of neutrophils and monocytes was determined by flowcytometery and immunoflorcent respectively. Results: The results showed that in the healthy and the infected cattles, extract containing 800 and 400 μg/ml protein, respectively caused the most death in monocytes and neutrophils. It also seemed that in the infected cattles, monocytes were more sensitive to cell death than the neutrophils. Discussion and Conclusion: The extract of Staphylococcus aureus induces apoptosis and necrosis in both neutrophils and monocytes of both the healthy and the infected cattle but the cells in the cattle with mastitis are more sensitive to apoptosis than in the non- infected cattles. In the case of mastitis due to Staphylococcus aureus, the bacterial extracts effects on monocytes and not the neutrophils. However, determination of bacterial extraction fractions and their effect on immune system cells are strongly recommended. مقدمه: با توجه به نقش شناخته شده اگزوپروتئین‌های استافیلوکوکوس اورئوس در سرکوب کردن پاسخ ایمنی ذاتی در عفونت‌های انسانی، هدف از مطالعه حاضر، تعیین نقش عوامل مترشحه باکتری در زنده مانی نوتروفیل‌ها و مونوسیت‏ها در گاوان سالم و مبتلا به ورم پستان است. مواد و روش‏‏ها: در تحقیق حاضر، پنج نمونه شیر از گاوان مبتلا به ورم پستان و پنج نمونه از گاوان سالم تهیه شد. نمونه خون هپارینه از گاوان مبتلا و سالم به منظور جداسازی نوتروفیل‌ها و مونوسیت‌ها گرفته شد. نوتروفیل‌ها با استفاده از داروی مگلومین و مونوسیت‌ها در هیستوپک جدا سازی شدند. عوامل مترشحه از باکتری استافیلوکوکوس اورئوس ATCC23219 تهیه و غلظت پروتئین موجود در آن به روش برادفورد به میزان 400 میکروگرم در میلی‌لیتر تعیین شد.تأثیر غلظت‌های مختلف عوامل مترشحه بر میزان زنده مانی نوتروفیل‌ها و مونوسیت‌ها به ترتیب بروش فلوسیتومتری و ایمونوفلورسانس تعیین شد. نتایج: در مورد گاوان سالم، عوامل مترشحه حاوی 800 میکروگرم در میلی‌لیتر پروتئین و در مورد گاوان مبتلا به بیماری400 میکروگرم در میلی‌لیتر پروتئین، بیشترین مرگ سلولی مونوسیت‌ها و نوتروفیل‌ها را داشتند. بررسی مراحل مختلف آپوپتوز در مونوسیت‌ها و نوتروفیل‌های گاوان سالم و مبتلا به بیماری نشان داد که حضور عوامل مترشحه در گاوان سالم موجب کاهش آپوپتوزدر مونوسیت‌ها و در گاوان بیمار موجب افزایش آپوپتوز شد. بحث و نتیجه‏گیری: ترشحات استافیلوکوکوس اورئوس باعث القا آپوپتوز و تا حدودی نکروز، هم در نوتروفیل‏ها و هم در مونوسیت‌های گاوان سالم و بیمار می‌شود، ولی این سلول‌ها در گاوان بیمار نسبت به مرگ سلولی حساس‏تر از گاوان سالم هستند. از طرفی در گاوان سالم نوتروفیل‌ها و در گاوان بیمار مونوسیت‌ها نسبت به مرگ سلولی حساس‏ترند. وقتی گاوان به بیماری ورم پستان استافیلوکوکوس اروئوس مبتلا می‌شوند، عوامل مترشحه از این باکتری تأثیر بیشتری روی مونوسیت‌ها نسبت به نوتروفیل‏ها دارند. آنچه مسلم است، تعیین دقیق محتویات ترشحات باکتری و نیز مکانیسم عمل آن‏ها به روشن شدن مطلب کمک خواهد کرد. https://bjm.ui.ac.ir/article_19462_d3bfa09d0238b656465e961b6bd92e0a.pdf