مرضیه سواری؛ سیدحمید زرکش اصفهانی
دوره 4، شماره 14 ، شهریور 1394، ، صفحه 141-152
چکیده
مقدمه: هورمون رشد انسانی یک پروتئین تکرشته است که دارای 191 اسیدآمینه و وزن مولکولی حدود 22 کیلودالتون است. به علت فعالیتهای زیستی مهم و متنوع هورمون رشد، این هورمون دارای کاربردهای گستردهایی ...
بیشتر
مقدمه: هورمون رشد انسانی یک پروتئین تکرشته است که دارای 191 اسیدآمینه و وزن مولکولی حدود 22 کیلودالتون است. به علت فعالیتهای زیستی مهم و متنوع هورمون رشد، این هورمون دارای کاربردهای گستردهایی در پزشکی و بیوتکنولوژیست. از اواخر سال 1970 استفاده از بیان ژن برای تولید پروتئینهای نوترکیب صنعتی تبدیل به یک صنعت چند میلیارد دلاری شده است. از طرفی مشکلاتی که در استخراج پروتئین درونسلولی وجود دارد باعث شده است که چندین روش برای این کار ارایه شود که در بسیاری از این روشها نیاز به تجهیزات خاص است. اما در بیشتر مطالعات، پژوهشگران نیاز به یک روش سریع و ارزان قیمت برای تخریب سلول دارند. هدف این پژوهش، تولید هورمون رشد انسانی توترکیب و مقایسه میزان استخراج آن با روش انجماد و ذوب و روش اولتراسونیک در سویه اوریگامی اشریشیاکلی است.
مواد و روشها: سلولهای مستعد سویه اوریگامی اشریشیاکلی با وکتور حاوی ژن هورمون رشد انسانی ترانسفورم شده و با کشت در محیط LB و القا با IPTG هورمون رشد انسانی نوترکیب تولید و با دو روش انجماد و ذوب و اولتراسونیک، استخراج و سپس این پروتئین با استفاده از روشهای الایزا، برادفورد، داتبلات و وسترنبلات بررسی شد.
نتایج: عمل ترانسفورم کردن باکتری با کارایی بالایی انجام گرفت و نتایج حاصل از داتبلات و وسترنبلات نشان داد که پروتئین هورمون رشد انسانی نوترکیب به خوبی تولید شد. با استخراج پروتئین با روشهای انجماد و ذوب و اولتراسونیک و بررسی نتایج حاصل از روشهای الایزا و برادفورد مشخص شد که میزان پروتئین استخراج شده در روش انجماد و ذوب آهسته بیشتر از انجماد و ذوب سریع و کمابیش هم اندازه پروتئین استخراج شده در روش اولتراسونیک است.
بحث و نتیجهگیری: برابر بودن میزان پروتئین استخراج شده در روش انجماد و ذوب آهسته و روش اولتراسونیک نشان دهنده این است که روش انجماد و ذوب آهسته، در مواردی که امکان استفاده از تجهیزات خاص و گرانقیمت مثل اولتراسونیک وجود ندارد، جایگزین مناسبی برای این روش است.
