زیست شناسی میکروارگانیسم ها

تعیین توالی ژن، کلونینگ و بیان آل- آسپاراژیناز نوترکیب از سودوموناس آیروجینوزا سویه SN4 در اشریشیاکلی

ارسطو بدویی دلفارد؛ زهرا کرمی؛ نرجس رمضانی پور

دوره 4، شماره 16 ، اسفند 1394، ، صفحه 11-20

چکیده

مقدمه: ال- آسپاراژیناز جایگاه با ارزشی از جنبه کاربردهای پزشکی و صنایع غذایی دارد. تقاضا برای این آنزیم دارویی هرساله چندین برابر می‏شود. مواد و روش‏‏ها: در این پژوهش، یک آسپاراژیناز از سودوموناس ... بیشتر مقدمه: ال- آسپاراژیناز جایگاه با ارزشی از جنبه کاربردهای پزشکی و صنایع غذایی دارد. تقاضا برای این آنزیم دارویی هرساله چندین برابر می‏شود. مواد و روش‏‏ها: در این پژوهش، یک آسپاراژیناز از سودوموناس ایروجینوزا سویه SN4، تعیین توالی و در اشریشیاکلی کلون شد. پرایمر‏ها بر اساس آل- آسپاراژیناز از سودوموناس ایروجینوزا سویه DSM50071 طراحی شدند که بر اساس توالی ژن 16S rRNA شباهت بالایی را نسبت به سویه SN4 نشان می‏داد. ژن آسپاراژیناز در معرض هضم آنزیمی توسط آنزیم‏های برشی NdeI و XhoI قرار گرفت و سپس، به داخل پلاسمید pET21a الحاق شد. محصول الحاق به درون سلول‏های مستعد E. coli (DE3) pLysS DH5a با روش CaCl2 ترانسفورم شد. سلول‏های E. coli ترانسفورم شده در محیط LB آگار حاوی 100 میکروگرم/ میلی‏لیتر آمپیسیلین و IPTG (1mM) رشد داده شدند. نتایج: ال-‏آسپاراژیناز نوترکیب در باکتری BL21 E. coli پس از 9 ساعت انکوباسیون، به میزان بالایی القا شد و فعالیت آسپاراژینازی بالایی به میزان 4/93 واحد در میلی‏لیتر را نشان داد. ال- آسپاراژیناز نوترکیب تعیین توالی شد و نتایج همردیفی نشان داد که توالی پیشنهادی اسید آمینه‏ایی آن از 350 اسید آمینه تشکیل شده که شباهت بالایی با ال- آسپاراژیناز‏های سایر سودوموناس ایروجینوز‏ها در حدود 99 درصد را نشان می‏دهد. نتایج نشان می‏دهد که آل- آسپاراژیناز SN4، باقی‏مانده‏های کاتالیزی و نواحی حفظ شده مشابه با سایر آسپاراژینازها را داراست. بحث و نتیجه‏ گیری: پژوهش حاضر نخستین گزارش در مورد کلونینگ و بیان آل- آسپاراژیناز نوترکیب از سودوموناس آایروجینوزا در اشریشیاکلی است که منبع بالقوه‏ایی از ال- آسپاراژیناز را برای بررسی اثر ضدسرطانی آن هم در شرایط آزمایشگاه و هم در موجود زنده فراهم می‏کند.

همسانه‏ سازی و بیان قسمت ایمنی‏ زای اگزوتوکسین A از سودوموناس‏آئروژینوزا

سحر نوری قراجلر؛ ملاحت احمدی؛ بهمن حسینی

دوره 1، شماره 4 ، بهمن 1391، ، صفحه 7-14

چکیده

مقدمه: سودوموناس آئروژینوزا میکروارگانیسم فرصت طلبی بوده که به یکی از عومل اصلی عفونت‏های بیمارستانی در سراسر جهان تبدیل شده است. اگزوتوکسین A یک آنزیم خارج سلولی است که توسط اغلب سویه های بالینی ... بیشتر مقدمه: سودوموناس آئروژینوزا میکروارگانیسم فرصت طلبی بوده که به یکی از عومل اصلی عفونت‏های بیمارستانی در سراسر جهان تبدیل شده است. اگزوتوکسین A یک آنزیم خارج سلولی است که توسط اغلب سویه های بالینی سودوموناس آئروژینوزا ترشح می‏شود. اگرچه پاتوژنز بیماری‏های ناشی از سودوموناس پیچیده است، ولی شواهد کلینیکی و تجربی فراوان نشان دهنده ارتباط اگزوتوکسین A با موارد ابتلا و مرگ و میر ناشی ازعفونت‏های سودوموناسی است . مواد و روش ‏‏ ها: در مطالعه حاضر، یک قطعه ایمنی زای 490 جفت بازی شامل دومین انتقال دهنده و دومین 1b از اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا سویه PAO1 توسط PCR تکثیرداده شد. محصول PCR در اشرشیا کلی DH5α کلون گشت و سپس در اشرشیا کلی BL21 با استفاده از وکتور پلاسمیدی (pET28a) بیان شد. وزن مولکولی پلی پپتید موردنظر در ژل SDS - PAGE ، 18 کیلو دالتون تعیین شد . نتایج: نتایج PCR و colony PCR تایید کننده صحت همسانه‏سازی دومین ایمنی‏زای اگزوتوکسین A بود. بررسی موقعیت پلی پپتید کلون شده درالکتروفورز عمودی با استفاده از ژل SDS - PAGE نشان داد که پلی پپتید مورد نظر توسط اشرشیاکلی به فضای پری پلاسمی تراوش می‏شود . بحث و نتیجه ‏ گیری: از آنجایی‏که حضور توکسین کامل برای ایجاد پاسخ های ایمنی ضروری نیست واین پلی پپتید نوترکیب از خاصیت آنتی ژنیک برخوردار است، بنابراین ممکن است به عنوان واکسن مؤثری در پیشگیری ازعفونت‏های ناشی از سودوموناس عمل کند .

زیست شناسی میکروارگانیسم ها

مقالات آماده انتشار

شماره جاری

دوره 12 (1402)

دوره 11 (1401)

دوره 10 (1400)

دوره 9 (1399)

دوره 8 (1398)

دوره 7 (1397)

دوره 6 (1396)

دوره 5 (1395)

دوره 4 (1394)

دوره 3 (1393)

دوره 2 (1392)

دوره 1 (1391)

کلیدواژه‌ها = کلونینگ

تعیین توالی ژن، کلونینگ و بیان آل- آسپاراژیناز نوترکیب از سودوموناس آیروجینوزا سویه SN4 در اشریشیاکلی

چکیده

همسانه‏ سازی و بیان قسمت ایمنی‏ زای اگزوتوکسین A از سودوموناس‏آئروژینوزا

چکیده