محمد حسن شاه حسینی؛ مریم قهری؛ محمد امین محمودی؛ الهام مسلمی
دوره 4، شماره 15 ، پاییز 1394
چکیده
مقدمه: بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاهها به علت استاندارد نبودن، از معایب روشهای تکثیر مولکولی است. در بیشتر مقالات چاپ شده در زمینه تشخیص PCR عوامل عفونی، اینترنال کنترل تکثیری (IC) وجود ...
بیشتر
مقدمه: بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاهها به علت استاندارد نبودن، از معایب روشهای تکثیر مولکولی است. در بیشتر مقالات چاپ شده در زمینه تشخیص PCR عوامل عفونی، اینترنال کنترل تکثیری (IC) وجود ندارد. هدف از پژوهش حاضر، طراحی و توسعه یک روش ساده و سریع، برای ساخت اینترنال کنترل آزمون PCR در آزمایشگاههای تشخیصی است. مواد و روش ها: در پژوهش حاضر، برای ساخت اینترنال کنترل رقابتی، از پرایمرهای مرکب و روش PCR-Cloning استفاده شد. بدین ترتیب که پرایمرهای جلویی و عقبی تشخیص PCR ویروس هپاتیت) (HBV، ویروس هرپس سیمپلکس HSV))، مایکوباکتریوم توبرکلوزیس (MTB)، مایکوپلاسما پنومونیه (Mpn)، کریپتوکوکوس نئوفورمنس (Cne)، جنس سالمونلا (Sal. sp) و جنس مایکوپلاسما (M. sp) را در بخش '5 پرایمرهای ژن کینتوپلاست لیشمانیا، به شکل دم طراحی و سنتز شد. اینترنال کنترلهای تکثیری با پلاسمید pTZ57R الحاق و در باکتری اشریشیاکلی JM107 ترانسفورم شد. تعداد حداقل IC در هر واکنش PCR از طریق رقیقسازی و همینطور طیف پاسخ PCR همراه با IC بررسی شد. نتایج: HBV–HSV–MTB–MPN–Cne–Sal. sp– و M. sp با پرایمرهای اختصاصی به ترتیب برابر با 272bp-284bp-415bp-345bp-245bp-454bp-262bp و محصول اینترنال کنترل هم به ترتیب 672bp-668bp-661bp-669bp-660bp-662bp-660bp جفت باز بود، که از نظر اندازه، اختلاف مطلوبی بین محصول PCR و IC وجود دارد و به آسانی در ژل قابل تفکیک است. تعداد حداقل IC در هر واکنش، 1000 عدد تعیین شد. حداقل و حداکثر حساسیت آزمون PCR همراه با IC برای همه عوامل در حد مطلوبی به دست آمد. در آزمون ویژگی با عوامل مختلف هم، هیچ محصول ناخواستهای مشاهده نشد. بحث و نتیجه گیری: نتایج منفی و مثبت کاذب که به علتهای مختلف در روش PCR رخ میدهد از مشکلات مهم این روش جذاب است. استفاده از یک اینترنال کنترل در تشخیص مولکولی به عنوان کنترل داخلی، میتواند این خطاها را شناسایی کند.
