مریم کی؛ زهره حجتی؛ مجید متولی باشی
دوره 3، شماره 10 ، تیر 1393، ، صفحه 37-44
چکیده
مقدمه : کلاولانیکاسید از جمله آنتی‌بیوتیک‌های مهار کننده‌ی β لاکتاماز بوده که توسط استرپتومایسس کلاولی‌جروس تولید میشود. کلاولانیکاسید در ترکیب با سایر آنتی‌بیوتیک‌های قوی و حساس ...
بیشتر
مقدمه : کلاولانیکاسید از جمله آنتی‌بیوتیک‌های مهار کننده‌ی β لاکتاماز بوده که توسط استرپتومایسس کلاولی‌جروس تولید میشود. کلاولانیکاسید در ترکیب با سایر آنتی‌بیوتیک‌های قوی و حساس به β لاکتاماز مورد استفاده بالینی قرار میگیرد. ژن CalR از جمله ژن‌هایی بوده که نقش مهمی در تنظیم تولید کلاولانیکاسید ایفا نموده و به منظور بیان ژن‌های اواخر مسیر بیوسنتز کلاولانیکاسید مورد نیاز است. مواد و روشها: کانسترک نوترکیب pMTclaR حاوی ژن تنظیمی claR از دانشگاه اصفهان تهیه و به منظور استفاده، از سویه استرپتومایسس لیویدنس با استفاده از روش لیز قلیایی استخراج شد. به منظور انجام ترانسفورماسیون پروتوپلاست از باکتری استرپتومایسس کلاولی‌جروس تهیه و در مرحله بعد با استفاده از پلی‌اتیلن‌‌گلایکول در سویه استرپتومایسس کلاولی‌جروس ترانسفورم شد. با استفاده از استخراج پلاسمید و انجام PCR ترانسفورماسیون تأیید شد. در نهایت به منظور بررسی نحوه تأثیر ژن claR اضافه شده از روش بایواسی استفاده شد. نتایج: کلونیهای گچی حاصل از رشد استرپتومایسس کلاولی‌جروس ترانسفورم شده بر روی محیط GYME حاوی آنتی‌بیوتیک مشاهده شد که تأیید انجام ترانسفورماسیون است. از سویه ترانسفورم شده پلاسمید استخراج و ساختار آن توسط ژل الکتروفورز تأیید شد. با استفاده از پلاسمید استخراج شده و پرایمرهای اختصاصی claR واکنش PCR انجام و باند 1334 جفت‌بازی مشاهده شد. در نهایت با انجام روش بایواسی و مشاهده‌ی هاله عدم رشد در نمونه ترانسفورم شده و مقایسه آن با نمونه کنترل مشخص شد که حضور پلاسمید نوترکیب سبب افزایش 3/3 برابری تولید کلاولانیکاسید در سویه استرپتومایسس کلاولی‌جروس شده است. بحث و نتیجهگیری: در مطالعه حاضر، با انتقال پلاسمید نوترکیب حاوی ژن claR میزان تولید آنتی‌بیوتیک کلاولانیکاسید تا 5/2 برابر افزایش یافت. با توجه به اهمیت دارویی کلاولانیکاسید ایجاد سویه‌هایی که توانایی تولید بیشتر کلاولانیکاسید را داشته باشند می‌توانند به بومی‌سازی تولید آنتی‌بیوتیک کلاولانیکاسید با صرفه اقتصادی بیشتر درمقیاس صنعتی کمک شایانی نماید.
